[發(fā)明專利]一種測定魚飼料中姜黃素含量的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610035254.6
• 申請日: 2016-01-20
• 公開（公告）號: CN105675752A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發(fā)明（設計）人: 劉永濤;艾曉輝;楊紅;董靖;胥寧;楊移斌;楊秋紅
• 申請（專利權）人: 中國水產(chǎn)科學研究院長江水產(chǎn)研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/12;A01K61/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發(fā)明屬于分析測試領域，更具體涉及一種測定魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧 基姜黃素和姜黃素含量的UPLC-TUV方法，它適用于測定魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧 基姜黃素和姜黃素的含量。

背景技術

姜黃素，別名姜黃色素，包括雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素，具有保 護腸粘膜、抗氧化、抗炎、抑菌、降血脂、保肝、利膽等藥理活性，3種成分的生理活性也 有所不同，姜黃素的抗氧化活性大于去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素，去甲氧基姜黃素 降血脂的活性明顯高于姜黃素，雙去甲氧基姜黃素在利膽及對內(nèi)皮細胞生長的抑制作用方面， 較去甲氧基姜黃素和姜黃素活性強。有研究表明，姜黃素在促進魚類生長、提高魚類消化酶 活性和抗氧化力、增強免疫功能及改善肌肉品質(zhì)和魚體色澤方面具有一定作用：在魚飼料中 添加姜黃素可顯著提高羅非魚、虹鱒和草魚的抗氧化能力；姜黃素可以促進大黃魚的生長、 增強大黃魚皮膚與肌肉的著色；飼料中添加姜黃素可以顯著提高草魚腸道中蛋白酶和淀粉酶 的活性，促進魚體對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收；飼料中添加4％～6％的姜黃素還能夠預防魚腸炎病、小 瓜蟲病、赤皮病等疾病。由此可見姜黃素作為添加劑在魚飼料中使用具有較好的應用前景和 實用性，為有效測定魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素3種成分各自的 含量，建立一種有效的方法測定魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的含 量是非常必要的。

目前，國內(nèi)外未見有關魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素含量測 定方法的報道或申請專利。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是在于提供了一種測定魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜 黃素含量的方法。該測定方法所用試劑價格便宜，操作方便快捷，測定方法的準確性和靈敏 度高，分析時間短。適于快速準確測定魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、甲氧基姜黃素和姜黃素 的含量。

為了實現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術措施：

一種測定魚飼料中姜黃素含量的方法，其步驟是：

A、魚飼料(通威黃顙魚配合飼料1號)中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃 素采用試劑A(15-30mL)提取，經(jīng)旋轉蒸發(fā)儀(予華YRE2000E)將試劑揮干；

B、再經(jīng)試劑B(1～10mL)復溶旋轉蒸發(fā)后的殘渣，將復溶溶液轉移到一支10mL塑料 離心管中置40℃氮吹儀(大森DS-K200型)上氮吹至干，向10mL塑料離心管中加入1mL 定容溶液C溶解塑料管中的殘渣；

C、再加入1mL試劑D，渦旋振蕩30s，7000r/min離心5min，將上層液體棄去；

D、用1mL注射器吸取下層液體過0.22μm聚醚砜水系濾頭，過濾液(溶解有雙去甲氧 基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的溶液C，1mL)放置到2mL進樣瓶(Waters，12×32mm， 帶蓋)中，超高效液相色譜紫外法(UPLC-TUV)測定。獲得雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜 黃素和姜黃素的色譜圖，通過色譜圖積分得出雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素 的峰面積。

E、超高效液相色譜紫外法(UPLC-TUV)條件：流動相的有機相為試劑A，水相為溶 液E，試劑A與溶液E的兩者的體積比為1:1～2:3，流速為0.3mL/min，柱溫為30℃，檢測波 長為430nm，色譜柱：超高效液相色譜柱ACQUITYUPLCBEHC18(100mm×2.1mm，1.7μm)， 進樣量為5.0μL。采用魚飼料基質(zhì)標準曲線方程計算魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基 姜黃素和姜黃素的含量。獲得雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的色譜圖，通過 色譜圖積分得出雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的峰面積，再將峰面積代入魚 飼料基質(zhì)標準曲線方程，計算出魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的含 量。