[發明專利]一種利用重組大腸桿菌無外源L-脯氨酸發酵生產反式-4-羥脯氨酸的方法

在審

• 申請號: 201610034465.8
• 申請日: 2016-01-19
• 公開（公告）號: CN105567720A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 張震宇;姚動邦;王曉姣;黃建華;魏照輝
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12P13/24
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一株在無外源L-脯氨酸條件下發酵生產反式-4-羥脯氨酸的重組菌的構建方法，是將proB₂A、 Ptrp2-hyp重組到質粒pUC19、pET28a上，構建重組質粒pUC19-proB₂A-Ptrp2-hyp(pUC19-BH)、 pET28a-proB₂A-Ptrp2-hyp(pET28a-BH),然后該重組質粒轉化到大腸桿菌中，實現proB₂A、hyp在大腸桿 菌中的共表達，該重組菌能夠在無外源L-脯氨酸條件下發酵生產反式-4-羥脯氨酸。

2.權利要求1所述的proB₂A、hyp共表達體系，僅hyp需要優化后的組成型的色氨酸啟動子的啟動， proB₂A并不需要啟動子啟動。

3.權利要求1所述的proB₂A是由proBA定點突變獲得的，其中proB基因突變了三個堿基，使編碼的 氨基酸發生改變。

4.權利要求1、2、3所述的proB₂A與proBA的區別僅僅在于proB發生突變，proA并未發生任何改 變。

5.權利要求1所述的重組載體所用的宿主菌為JM109或者BL21，同樣發酵條件下JM109作為宿主菌 的產量較高。

6.權利要求1、2所述的hyp是經優化后能在大腸桿菌中高效表達的基因。

7.反式-4-羥脯氨酸的生產方法，其特征是將權利要求1所述的重組微生物在培養基上培養，將得到 的培養物、菌體或者它們的處理物作為酶源，依葡萄糖為底物，生成L-脯氨酸，然后在2-酮戊二酸和亞鐵 離子的存在下，使L-脯氨酸轉化為反式-4-羥基-L-脯氨酸。