[發明專利]一種利用基因組改造的重組大腸桿菌發酵生產L-脯氨酸的方法

在審

• 申請號: 201610034446.5
• 申請日: 2016-01-19
• 公開（公告）號: CN105602978A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發明（設計）人: 張震宇;姚動邦;王曉姣;魏照輝;黃建華
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12P13/24
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一株發酵生產L-脯氨酸的基因組改造的重組大腸桿菌構建方法是，將具有點突變的 γ-谷氨酸激酶基因(proB₂A)連接到質粒pET28a上，構建重組質粒pET28a-proB₂A，然后將 PCR獲得的proB₂500替換掉重組大腸桿菌基因組中的proB500，構建好的重組大腸桿菌基因 改造菌在合適的培養基中能夠生產L-脯氨酸。

2.權利要求1所述的載體、多拷貝質粒包括但不局限于pET-28a、pUC19、pKYP10等。

3.權利要求1所述的proB500并不是γ-谷氨酸激酶基因proB的全部序列，而是proB起 始密碼子開始往后的500bp片段。

4.權利要求1所述的proB₂500并不是具有點突變的γ-谷氨酸激酶基因proB₂的全部序 列，而是proB₂起始密碼子開始往后的500bp片段。

5.權利要求1所述的方法，其中所用到的大腸桿菌是脯氨酸分解缺陷型菌株BL21(DE3) ΔputA。

6.權利要求1所述的增強L-脯氨酸生物合成系統活性的方法，其特征在于通過導入受 脯氨酸反饋抑制顯著減少的γ-谷氨酸激酶基因(proB₂A)，增加重組微生物中的該γ-谷氨 酸激酶基因的拷貝數，以及用proB₂500替換掉基因組中的proB500來實現。

7.L-脯氨酸的生產方法，其特征是將權利要求1、5所述的重組微生物在培養基上培養， 將得到的培養物、菌體或者它們的處理物作為酶源，在葡萄糖存在下，于水性介質中使葡萄 糖轉化為L-脯氨酸，再從該水性介質中提取生成的L-脯氨酸。