[發(fā)明專利]一種分子標(biāo)志物及其制備生物標(biāo)志物試劑的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610034426.8
• 申請日: 2016-01-19
• 公開（公告）號: CN105699367B
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 袁正偉;顧卉;安東;李慧;魏曉偉;劉丹
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 沈陽智龍專利事務(wù)所(普通合伙) 21115
• 代理人: 宋鐵軍

本發(fā)明涉及一種神經(jīng)管畸形產(chǎn)前無創(chuàng)診斷分子標(biāo)志物，包括6個miRNA（miR?144、miR?142?3p、miR?720、miR?1275、miR?575和miR?765）和12個蛋白質(zhì)（前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9、銅藍蛋白、白血病抑制因子、14?3?3、對氧磷酶、血漿a?球蛋白抑制因子H4、血清S蛋白、糖基化磷脂酰肌醇特異性磷脂酶D1、胎球蛋白A、淀粉樣蛋白P、血漿a?球蛋白抑制因子H2和血小板因子4）。還包括該分子標(biāo)志物的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于檢驗醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、生物技術(shù)、生物化學(xué)及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種神經(jīng)管畸形產(chǎn)前無創(chuàng)診斷分子標(biāo)志物，及其作為檢測試劑的應(yīng)用及使用方法。

背景技術(shù)

神經(jīng)管畸形( neural tube defects, NTDs) 包括無腦畸形、脊柱裂、腦膨出、腦積水等, 是一種嚴(yán)重的出生缺陷。全世界每年有神經(jīng)管畸形兒30 萬～40 萬例，中國發(fā)生率明顯高于西方國家。神經(jīng)管畸形病理改變復(fù)雜，導(dǎo)致治療效果很差。近年來，雖然隨著孕期補充葉酸的普及率提高，神經(jīng)管畸形的發(fā)生率有所降低。但由于神經(jīng)管畸形是復(fù)雜的多基因疾病，由環(huán)境因素和遺傳因素共同作用所致，單純補充葉酸很難預(yù)防所有的神經(jīng)管畸形的發(fā)生，目前為止，神經(jīng)管畸形仍然是常見的出生缺陷之一，腦積水、下肢功能障礙和尿便失禁依然是嚴(yán)重的術(shù)后并發(fā)癥。

建立無創(chuàng)的神經(jīng)管畸形產(chǎn)前診斷新方法，一直是人們不斷追求的理想目標(biāo)。隨著影像學(xué)技術(shù)（超聲和MRI）的不斷發(fā)展使一些有明顯結(jié)構(gòu)異常畸形的診斷時間獲得提前，但也只能在畸形完全形成后給予診斷，失去治療和預(yù)防的最佳時機，不能達到早期診斷的要求。 通過在孕婦血液和尿液中篩選早期診斷的分子標(biāo)志物,對于建立早期無創(chuàng)診斷新方法具有重要意義。羊水和血清中甲胎蛋白的含量測定可以用于神經(jīng)管畸形的篩查，但由于甲胎蛋白檢測受影響因素較多，包括母親年齡與體重、懷孕胎齡和病毒感染等，同時甲胎蛋白檢測的假陽性和假陰性率也較高。目前尚無理想的神經(jīng)管畸形產(chǎn)前診斷分子標(biāo)志物。由于神經(jīng)管畸形屬于多基因疾病，發(fā)病機制復(fù)雜，影響因素較多，并不能通過單一的特異性標(biāo)志物來實現(xiàn)準(zhǔn)確診斷和疾病程度判定，因此，非常適合利用高通量的基因組和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)從眾多復(fù)雜的基因或蛋白質(zhì)中篩選出一組（數(shù)十或數(shù)百個）特異性分子標(biāo)志物，才能更準(zhǔn)確進行早期診斷和疾病進展程度判斷。因此，我們實驗室利用miRNA芯片對神經(jīng)管畸形孕婦外周血特異改變的miRNA進行篩選，并利用定量PCR進行大樣本的驗證。利用蛋白質(zhì)組學(xué)（ITRAQ）方法比較神經(jīng)管畸形胎兒母親血清與正常孕婦血清的差異表達蛋白質(zhì)，并利用ELISA方法進行大樣本驗證。因此，我們發(fā)現(xiàn)了一些有臨床應(yīng)用價值的分子標(biāo)志物，對于神經(jīng)管畸形的早期診斷和干預(yù)具有極其重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明是一種神經(jīng)管畸形產(chǎn)前無創(chuàng)診斷分子標(biāo)志物，及其作為檢測試劑的應(yīng)用及使用方法，其目的在于解決神經(jīng)管畸形發(fā)病機制復(fù)雜，影響因素較多，并不能通過單一的特異性標(biāo)志物來實現(xiàn)準(zhǔn)確診斷和疾病程度判定的問題。

技術(shù)方案：

一種分子標(biāo)志物，其特征在于：該標(biāo)志物由6個miRNA和12個蛋白質(zhì)組成，其中所述的miRNA分別為：miR-144、miR-142-3p、miR-720、miR-1275、miR-575、miR-765；所述的蛋白質(zhì)分別為：前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9、銅藍蛋白、白血病抑制因子、14-3-3、對氧磷酶、血漿a-球蛋白抑制因子H4、血清S 蛋白、糖基化磷脂酰肌醇特異性磷脂酶D、胎球蛋白、淀粉樣蛋白P、血漿a-球蛋白抑制因子H2、血小板因子4。

還包括含有該分子標(biāo)記物的試劑盒。

所述的神經(jīng)管畸形產(chǎn)前診斷生物標(biāo)志物試劑針對的神經(jīng)管畸形包括無腦畸形、腦膨出、腦積水、脊柱裂、脊膜膨出。

一種由所述的分子標(biāo)志物制備的神經(jīng)管畸形產(chǎn)前診斷生物標(biāo)志物試劑的使用方法，其特征在于：該方法使用訓(xùn)練的算法來比較生物樣品和對照樣品之間的miRNA和蛋白質(zhì)水平的差異，確定神經(jīng)管畸形分子標(biāo)志物最佳診斷模型。