[發明專利]一種抗錦鯉免疫球蛋白IgM的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201610033741.9
• 申請日: 2016-01-19
• 公開（公告）號: CN105646715B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 李瑩瑩;王慶;曾偉偉;王英英;劉春;鄭樹城;石存斌;宋新建;黃琦雯
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院珠江水產研究所
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

本發明公開了抗錦鯉IgM的單克隆抗體、雜交瘤細胞株及其應用。所述抗錦鯉IgM的單克隆抗體是由保藏編號為CCTCC NO：C2015218的雜交瘤細胞株A5?E10分泌產生的。利用所述的單克隆抗體可以用于錦鯉或普通鯉魚某病原或水產疫苗特異性抗體的檢測，從而進行疾病的早期診斷和疫苗使用效果的評價，對錦鯉或普通鯉魚疾病流行病學調查、病原診斷具有較高的臨床使用及推廣價值，為其他養殖魚類疾病的防治提供參考。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種抗錦鯉免疫球蛋白IgM的單克隆抗體及其應用。

背景技術

錦鯉作為觀賞魚的一個大類，體型優美、色彩艷麗，在國內已大量養殖，是目前休閑漁業的主要品種。隨著養殖環境越來越惡劣，錦鯉的各種傳染性疾病例如鯉春病毒血癥、皰疹病毒性乳頭瘤、錦鯉皰疹病毒病等開始廣泛傳播，亟需各種疫病檢測方法的建立，而抗錦鯉免疫球蛋白IgM單克隆抗體的成功制備將為錦鯉各種疫病的免疫學診斷提供重要材料。

抗體是脊椎動物的免疫系統在抗原的刺激下，由淋巴細胞所產生的可與相應的抗原發生特異性結合的免疫球蛋白，哺乳動物中已經報道的免疫球蛋白包括：免疫球蛋白M(IgM)，免疫球蛋白D(IgD)，免疫球蛋白A(IgA)，免疫球蛋白E(IgE)和免疫球蛋白G(IgG)，魚類雖然是低等的脊椎動物，但是其免疫系統同樣可以產生不同類型的免疫球蛋白，硬骨魚類中已經報道的免疫球蛋白包括IgM、IgD、IgZ和IgT，IgM是一類存在于所有有頜類脊椎動物中的抗體。

當前，對于錦鯉皰疹病毒的檢測，最為常用的方法是基于PCR擴增技術的各種分子生物學檢測方法，具有較高的敏感性和特異性。但這些分子生物學方法都是檢測病毒的核酸存在與否，方法單一，經常導致假陽性和假陰性結果，難于對該病做到定量檢測與確診。因此，急需其它方法來彌補分子生物學檢測方法的不足，如各種免疫學（血清學）檢測方法。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一株雜交瘤細胞株A5-E10，已于2016年1月14日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：C2015218。

本發明的另一個目的是提供一種由上述保藏編號為CCTCC NO：C2015218的雜交瘤細胞株分泌產生的抗錦鯉免疫球蛋白IgM單克隆抗體。

本發明的另一個目的是提供一種錦鯉皰疹病毒間接ELISA檢測方法。

本發明所采取的技術方案是：

一種抗錦鯉免疫球蛋白IgM的單克隆抗體，其可特異性識別錦鯉免疫球蛋白IgM，效價高于1:10000。所述單克隆抗體由保藏編號為CCTCC NO：C2015218的雜交瘤細胞株分泌產生。

一株雜交瘤細胞株，已于2016年1月14日保藏于中國典型培養物保藏中心（CHINACENTER FOR TYPE CULTURE COLLECTION，CCTCC)，保藏編號為CCTCC NO：C2015218，保藏地址為：中國，武漢，武漢大學。

上述的單克隆抗體在制備用于檢測錦鯉免疫球蛋白IgM的免疫檢測工具中的應用。

上述的單克隆抗體在制備用于檢測錦鯉皰疹病毒的免疫檢測工具中的應用。

所述免疫檢測工具包括試劑、試劑盒、芯片或試紙。

一種錦鯉皰疹病毒間接ELISA檢測試劑盒，其包括上述的抗錦鯉免疫球蛋白IgM的單克隆抗體。

所述試劑盒中還包括：包被液、標準血清、洗滌液、HRP標記羊抗鼠抗體、TMB顯色液和終止液。

一種錦鯉皰疹病毒間接ELISA檢測方法，包括如下步驟：

（1）加樣：將待檢樣品加入包被有KHV病毒的酶標板中；

（2）溫育：用封板膜封板后置36～38℃溫箱中孵育