[發(fā)明專利]枯草芽孢桿菌生物保鮮劑及在大黃魚保鮮中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610032885.2
• 申請(qǐng)日: 2016-01-19
• 公開（公告）號(hào): CN105613707A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張?chǎng)?/a>;張紹升;倪莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福州大學(xué)
• 主分類號(hào): A23B4/20
• 分類號(hào): A23B4/20;A23B4/09
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水產(chǎn)品防腐保鮮技術(shù)，具體涉及枯草芽孢桿菌作為生物保鮮劑在大黃 魚防腐保鮮中的應(yīng)用以及保鮮防腐的方法。

背景技術(shù)

水產(chǎn)品是人們食品的重要組成部分，冰鮮保藏是水產(chǎn)在市場(chǎng)流通的主要方式之 一。由于水產(chǎn)品含有豐富的蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)，容易引起腐敗細(xì)菌快速生長繁殖，腐敗物質(zhì) 大量積累，因而極易變質(zhì)，影響到水產(chǎn)品的質(zhì)量，甚至威脅人的身體健康。因此，水產(chǎn)品的保 鮮方法成為目前的研究熱點(diǎn)。目前，應(yīng)用于水產(chǎn)品的保鮮技術(shù)主要有低溫保鮮、化學(xué)保鮮、 氣體保鮮、輻射保鮮和生物保鮮等。生物保鮮以其安全性高、能耗低的優(yōu)勢(shì)成為開發(fā)新熱 點(diǎn)。植物源保鮮劑主要起抗氧化作用；動(dòng)物源抑菌劑如魚精蛋白；水產(chǎn)品中常用的微生物源 抑菌劑主要有乳酸菌產(chǎn)生的乳酸菌素、納它霉素等。動(dòng)/植物來源的保鮮劑受原料限制，價(jià) 格較高；而目前產(chǎn)業(yè)化的微生物源保鮮劑均為微生物代謝物，日益受到重視。

枯草芽孢桿菌菌株具有抑制病原菌和微藻的活性，被允許使用在果蔬、魚飼料中。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種枯草芽孢桿菌作為生物保鮮劑在水產(chǎn)品保鮮防腐中 的應(yīng)用，為水產(chǎn)品特別是冰鮮大黃魚的保鮮提供新的途徑。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本應(yīng)用中所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌（Bacillussubtulis）BSh0851，保藏日期 為2009年12月13日，保藏單位是中國微生物菌株保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地 址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏號(hào)為CGMCC No.3502。

所述枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）為革蘭氏陽性菌，芽孢橢圓到柱狀，位于 菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大，菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，常形成 皺醭；需氧菌，可利用蛋白質(zhì)、多種糖及淀粉，V-P陽性。

采用優(yōu)化培養(yǎng)后的培養(yǎng)條件，通過液體發(fā)酵制得含有高活性物質(zhì)的發(fā)酵液，并采 用酸沉淀的方法得到脂肽類活性物質(zhì)粗提物。粗提物產(chǎn)量為0.45g/L，對(duì)105cfu/mL嗜冷桿 菌、105cfu/mL假單胞菌和105cfu/mL希瓦氏菌3菌混合液的抑菌率為33%。

將0.3mg/mL粗提物與0.3mg/mL尼薩普林和20mg/mL殼聚糖鹽酸鹽配伍，制成混合 保鮮劑。使用本發(fā)明的保鮮劑對(duì)大黃魚進(jìn)行保鮮，儲(chǔ)藏5天后，揮發(fā)性鹽基氮（TVB-N）和微 生物以及感官指標(biāo)均符合我國鮮大黃魚等相關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（SC/T3101-2010）中一級(jí)鮮度，防 腐保鮮效果顯著，延長了大黃魚的貨架期。結(jié)果表明枯草芽孢桿菌發(fā)酵液粗提物能夠有效 地抑制大黃魚表面細(xì)菌的生長，同時(shí)對(duì)大黃魚魚肉的脂肪酸氧化和新鮮度也有一定的改善 效果。

大黃魚保鮮方法是用碎冰將鮮活大黃魚失活，將枯草芽孢桿菌粗提物、尼薩普林、 殼聚糖鹽酸鹽溶液混合噴灑在魚體，于4℃冰箱內(nèi)冰上貯藏。

具體包括以下步驟：（1）種子液制備：從營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上挑取一接種環(huán)已 活化的枯草芽孢桿菌接種到種子培養(yǎng)基中，37℃，200r/min，培養(yǎng)24h；種子培養(yǎng)基為牛肉膏 3g、氯化鈉5g、蛋白胨10g、蒸餾水1000mL、pH7.0-7.2；

（2）發(fā)酵液培養(yǎng)基制備：酵母浸膏14g，無水葡萄糖14g，MgSO₄1g，蒸餾水1000mL，pH7.0；

（3）枯草芽孢桿菌無菌體發(fā)酵液的制備：在步驟（2）制得的發(fā)酵液中接入步驟（1）制得 的種子液，接種量為7%；調(diào)節(jié)初始pH值8；培養(yǎng)溫度38℃，轉(zhuǎn)速100r·min^-1，裝液量150mL/ 250mL搖瓶；在此條件下培養(yǎng)24h；

（4）無菌發(fā)酵液的制備：將步驟（3）所述枯草芽孢桿菌培養(yǎng)液在10000r/min離心15min 后，用0.22μm濾膜過濾，即為無菌體的發(fā)酵濾液；

（5）發(fā)酵液粗提物制備：將步驟（4）所述無菌發(fā)酵液用2mol/L的HCl調(diào)至pH2.0，于4℃放 置3d，再次10000r/min離心10min，收集沉淀物，溶解于無菌水中，并用NaCl調(diào)節(jié)pH至7；