[發明專利]一種毛梾組培苗的初代培養方法

在審

• 申請號: 201610032512.5
• 申請日: 2016-01-19
• 公開（公告）號: CN105724248A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 蘇淑釵;暴甜
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及植物組織培養領域，具體為一種毛梾組培苗的初代培養方法。

背景技術

毛梾(CornuswalteriWanger.)屬山茱萸科梾木屬，又名車梁木。落葉喬木，高達8-15m。毛梾根系發達，適應力強，對土壤要求不嚴，在我國大部分地區的荒山荒坡上都適宜生長。毛梾是木本油料植物，果實含油可達27-38％，供食用或作高級潤滑油，可制成生物柴油原料油，油渣還可作飼料和肥料；木材堅硬，紋理細密、美觀，可作家具、車輛、農具等用；葉和樹皮可提制拷膠，又可作為“四旁”綠化和水土保持樹種，更是發展林業生物柴油的良好樹種。

由于對毛梾的果實油脂價值的開發和利用，對苗木數量和質量的要求不斷提高，而傳統的播種、扦插、嫁接等方式育苗難以滿足市場需求?，F代育苗技術中，植物組培快繁技術能夠在短時間內快速大量繁殖，并獲得基因型一致的優良種苗，適用于毛梾樹種苗木的工廠化生產。在組織培養的初代培養、增殖培養、生根培養和馴化移苗四步驟中，初代培養是獲得組培苗的重要步驟，也是組織培養的關鍵技術。

但目前關于毛梾組織培養方面的研究鮮有報道，僅限于初代培養，但其使用的消毒劑升汞為劇毒藥品，且消毒處理結果存在污染率、褐化率高的問題；對基本培養基的選擇試驗范圍太小所得結果MS培養基仍不適合毛梾組培苗長期生長，會出現葉片接觸培養基發紫至死亡的現象；培養條件不適宜，導致組培苗出現玻璃化現象等。因此特別需要一種適合毛梾組培苗初代培養的方法，以解決上述現有存在的技術問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種毛梾組培苗的初代培養方法，克服現有技術中的缺點，提高毛梾外植體存活率，減少褐化和玻璃化現象，獲取更多高質量萌芽，促進毛梾組織培養體系的建立。

本發明的一種毛梾組培苗的初代培養方法，通過下述技術方案實現，包括以下步驟：

(1)外植體消毒：選取健壯毛梾植株當年生帶腋芽的莖段或莖尖為外植體，剪去葉片切割成5-8cm的小段，洗衣粉液浸泡15-30min后，用紗布包裹流水沖洗1-2h，并在超凈工作臺中進行消毒處理，外植體污染率7％-40％；

(2)初代培養：將經過步驟(1)消毒處理后的外植體接種到初代培養基中，在適宜培養條件下培養，外植體存活率60％-93％，萌發率90％-100％，幼苗生長正常。

步驟(1)中所述的消毒方法為用75％乙醇消毒30-60s后，用無菌水沖洗3-5次，再用1％-8％次氯酸鈉溶液消毒20-35min，或5％-15％次氯酸鈣溶液消毒15-30min，最后用無菌水沖洗3-8次；

步驟(2)中所述的誘導培養基為DKW+6-BA1-5mg/L+IBA0.1-0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6.0g/L，pH調至5.8-6.5。

步驟(2)中所述的毛梾組培苗初代培養的培養條件為溫度22-28℃，光照強度1800-2500lx，每日光照12-16h。

本發明的有益效果為：不同植物以及同種植物不同部位對組織培養營養要求不同，本發明關鍵考慮外植體消毒處理、培養基的選擇以及培養條件和激素組合等因素，通過試驗逐一解決，克服了毛梾初代組培的技術瓶頸，能夠獲得健康的毛梾組培苗，為毛梾組培體系建立奠定基礎。

1、本發明選用低毒的消毒劑次氯酸鈉溶液替代劇毒藥劑升汞溶液，確定了適宜的消毒時間和濃度，大大降低了毛梾組培苗污染率，存活率60-93％。

2、本發明經過基本培養基試驗篩選出最適宜毛梾組培苗生長的培養基，即選用DKW為基本培養基，極大減少褐化率，葉片接觸培養基發紫至死亡的現象基本消失，利于組培苗長期健康生長。

3、本發明選用適宜激素類型組合和濃度，使得玻璃化發生率降低，促進芽的分生，獲得更多高質量萌芽。

4、本發明中設置的組培苗培養條件為溫度22-28℃，光照強度1800-2500lx，每日光照12-16h，強光照可減少玻璃化現象，并有利于獲得健壯組培苗。

具體實施方式

以下實施例是對本發明進一步的詳述，不是對本發明的限制。

實施例1：

本發明的一種毛梾組培苗的初代培養方法，包括以下步驟：

(1)外植體消毒：選取健壯毛梾植株當年生莖尖為外植體，切割成5-8cm的小段，洗衣粉浸泡15min后，用紗布包裹流水沖洗1h，在超凈工作臺中進行消毒處理，用75％乙醇消毒50s后，用無菌水沖洗3次，再用5％次氯酸鈉溶液消毒35min，用無菌水沖洗3次；