[發明專利]一株牛支原體及其應用

有效

• 申請號: 201610031897.3
• 申請日: 2016-01-19
• 公開（公告）號: CN105441368B
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 張德明;林燕花;王錦祥;李金鳳;車勇良;張夢青
• 申請（專利權）人: 福清市默克獸醫院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/35
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明涉及一株牛支原體及應用。其步驟為通過病原分離培養、動物回歸試驗和16S rRNA基因序列測定，確定病原為牛支原體，命名為牛支原體MbovFJ1201株，保藏編號為CCTCC NO：M2015772。將此菌接種到培養基擴大培養，收獲培養物，將培養物滅活，滅活后按1:1（V/V）比例加入ISA?206佐劑混合得到滅活疫苗。本發明的疫苗針對性強，免疫保護效果好，能顯著地減輕因感染牛支原體而引起的肺臟病變，提高平均日增重，能達到預防和控制牛支原體相關疾病的良好效果。

技術領域

本發明涉及牛用疫苗領域，具體說是一株牛支原體及其應用。

背景技術

牛支原體相關疾病是危害養牛業的重要疫病。牛支原體感染能引起牛的肺炎、關節炎、乳房炎和結膜炎等疾病。自1961年美國首次報道分離到牛支原體以來，在不同國家都有暴發流行，給養牛業造成了嚴重的經濟損失。美國和歐洲因牛支原體感染所引起的犢牛肺炎所致的損失就達數億美元之巨。石磊等于2008年首次報道我國牛支原體的流行，此后的調查研究表明牛支原體在我國的牛群中普遍存在。牛支原體不僅導致很高的發病率和死亡率，而且經治療后癥狀緩解的患牛一般發育遲緩，甚至成為廢牛。

由于支原體的細胞結構介于病毒和細菌之間，且支原體的分離培養難度很大。因此，對其致病機理以及預防控制手段的研究還較不完善。目前，一般使用常規抗菌藥物對牛支原體相關疾病進行處理，但作用甚微。因此，亟需一種免疫效果確實的疫苗對該病進行預防和控制。

發明內容

本發明提供一株牛支原體及其應用。

利用從病牛肺臟中分離得到的牛支原體(Mycoplasma bovis)MbovFJ1201株為種子，此菌株于2015年12月23日保藏在中國典型培養物保藏中心，地址為武漢大學，保藏編號為CCTCC NO：M2015772。

本發明的目的在于提供一種以ISA-206為佐劑的牛支原體滅活疫苗，用于牛支原體相關疾病的預防和控制。

本發明的目的通過如下方法實現。

牛支原體滅活疫苗中含牛支原體菌量為10⁸ccu/mL、50wt.% ISA-206佐劑。

由以下步驟制備而成：

1）抗原液的制備；

2）疫苗的配制，取滅活菌液與ISA-206佐劑混合，分裝后密封保存。

所述抗原液的制備由以下步驟完成：將牛支原體MbovFJ1201株按3% V/V接種到培養基擴大培養，培養3-5天，收獲培養物，測定菌株濃度并調整為2×10⁸ccu/mL；加入甲醛，使其終濃度為0.2%，置4℃滅活72小時制成滅活菌液。

疫苗的配制是將滅活菌液和ISA-206佐劑按體積比1:1混合制備而成。

步驟1）所述培養條件為為37℃、5% CO²培養3~5天，控制培養時間，保證滅活疫苗具有適量的抗原量。

步驟2）所述培養基為含酚紅的PPLO培養基。

本發明所述牛支原體滅活疫苗，30日齡犢牛頸部三角區肌肉注射2mL疫苗，60日齡以2mL劑量加強免疫一次，免疫后保護力可達到80%以上，免疫保護期至少可持續5個月，其免疫保護效果確實，制備工藝簡單，具有良好的應用前景。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明作進一步詳細說明。

實施例1

牛支原體的分離和鑒定