[發(fā)明專利]化合物H2在制備脂肽類抑菌制劑中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610031651.6
• 申請(qǐng)日: 2016-01-18
• 公開（公告）號(hào): CN105557714B
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 繆衛(wèi)國(guó);靳鵬飛;王皓楠;劉文波;鄭服叢;謝清標(biāo)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 海南大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N43/90
• 分類號(hào): A01N43/90;A01P3/00;A01P21/00;C07D487/04;C12P17/18;C12R1/07
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司44218
• 代理人: 馬慶文

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化合物領(lǐng)域，具體涉及化合物H2在制備脂肽類抑菌制劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

芽孢桿菌是一類產(chǎn)生芽孢的革蘭氏陽(yáng)性菌株，它的分布廣泛，生理特征豐富，易于分離和培養(yǎng)，是自然界中重要的微生物菌群，芽孢桿菌可以產(chǎn)生多種抗菌活性物質(zhì)，包括由非核糖體途徑合成的非核糖體肽類抗生素以及由核糖體途徑合成的細(xì)菌素、酶類及其他活性蛋白類抗菌物質(zhì)等。

168菌株是芽孢桿菌的模式菌株，也是目前研究的最為透徹的菌株，他的全基因組已于1997年測(cè)序完成。與野生芽孢桿菌不同的是模式菌株168由于在實(shí)驗(yàn)室的長(zhǎng)期繼代培養(yǎng)，發(fā)生了很多的自發(fā)突變因而喪失了很多野生型的特點(diǎn)，比如sfp基因的自發(fā)突變，使得168菌株喪失了產(chǎn)生脂肽類化合物的能力，因而缺失了抑菌的能力。sfp基因編碼的4’-磷酸泛酰巰基乙胺基轉(zhuǎn)移酶，是芽孢桿菌非核糖體途徑合成脂肽類化合物的關(guān)鍵基因。

本研究的目標(biāo)菌株解淀粉芽孢桿菌HAB-2(2015年1月27日在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心進(jìn)行了菌種保藏，并證明存活，其保藏登記號(hào)為：CCTCC M 2015070，地址為武漢大學(xué)內(nèi))經(jīng)過一系列的前期實(shí)驗(yàn)表明：生防菌HAB-2具有廣譜的抑制熱帶病原真菌的活性，并且對(duì)部分植物具有促進(jìn)生長(zhǎng)，對(duì)鮮果具有保鮮的作用，但是該菌株沒有sfp基因，但是通過現(xiàn)代的儀器分析手段我們又在HAB-2發(fā)酵液中檢測(cè)得到了由于sfp缺失而不可能得到的脂肽類物質(zhì)——表面活性素類物質(zhì)，因此研究該菌株的具體活性成分很有必要，值得進(jìn)一步的研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)中的不足，對(duì)解淀粉芽孢桿菌HAB-2的發(fā)酵液的具體活性成分進(jìn)行研究，提供化合物H2在制備脂肽類抑菌制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了化合物H2在制備脂肽類抑菌制劑中的應(yīng)用，化合物H2的結(jié)構(gòu)式如下式所示：

優(yōu)選地，化合物H2應(yīng)用于制備防治植物真菌病害制劑。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述植物真菌病害為番茄早疫病、西瓜枯萎病、香蕉枯萎病、棉花枯萎病、橡膠炭疽病、橡膠樹棒孢霉落葉病、茶輪斑病、芒果炭疽病、和/或橡膠褐根病中的一種或多種。

優(yōu)選地，化合物H2從解淀粉芽孢桿菌HAB-2的發(fā)酵液中分離得到，所述菌株HAB-2的保藏編號(hào)為：CCTCC M 2015070。

優(yōu)選地，化合物H2的制備方法如下：

步驟1，取解淀粉芽孢桿菌HAB-2的發(fā)酵液，正丁醇萃取，取萃取液，濃縮；

步驟2，對(duì)濃縮物采用柱層析分離得到化合物H2。

進(jìn)一步優(yōu)選地，柱層析分離包括以下步驟：

(1)對(duì)濃縮物使用減壓柱層析(抽柱Vacuum Liquid Chromatography)，采用氯仿和甲醇進(jìn)行梯度洗脫；

(2)取具有抑菌活性的餾分，采用常壓柱分離，洗脫所用溶劑為步驟(1)中洗脫出具有抑菌活性的餾分的溶劑；

(3)取步驟(2)得到的餾分中具有抑菌活性的餾分，采用凝膠柱分離，洗脫所用溶劑為步驟(1)中洗脫出具有抑菌活性的餾分的溶劑；

(4)取步驟(3)得到的餾分中具有抑菌活性的餾分，采用凝膠柱分離洗脫所用溶劑為甲醇；

(5)取取步驟(4)得到的餾分中具有抑菌活性的餾分，過C18反向柱，采用甲醇和水梯度洗脫，合并具有抑菌活性的部分，濃縮干燥，即得。

更進(jìn)一步優(yōu)選地，若步驟(1)得到的具有抑菌活性的餾分由不同比例的氯仿和甲醇的混合溶劑洗脫出來的，則步驟(2)洗脫所用溶劑的極性小于或等于步驟(3)洗脫所用溶液的極性。

優(yōu)選地，所述解淀粉芽孢桿菌HAB-2的發(fā)酵液的采用下述步驟制備而成；將解淀粉芽孢桿菌HAB-2接種于液體的溶菌肉湯培養(yǎng)基中，在26～30℃的條件下，50～500轉(zhuǎn)/分鐘搖菌1～3天，即得到發(fā)酵液。

本發(fā)明對(duì)解淀粉芽孢桿菌HAB-2的發(fā)酵液的具體活性成分進(jìn)行研究，分離得到化合物H2，具有廣譜的抑制熱帶病原真菌的活性，并且對(duì)部分植物具有促進(jìn)生長(zhǎng)，對(duì)鮮果具有保鮮的作用，可應(yīng)用于制備脂肽類抑菌制劑，防治植物真菌病害，尤其可應(yīng)用于番茄早疫病、西瓜枯萎病、香蕉枯萎病、棉花枯萎病、橡膠炭疽病、橡膠樹棒孢霉落葉病、茶輪斑病、芒果炭疽病、和/或橡膠褐根病等，值得應(yīng)用推廣。

附圖說明

圖1為化合物H2的¹H-¹H COSY、HMBC和NOSEY的關(guān)聯(lián)圖；