[發(fā)明專利]AaPDR3基因啟動子及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610031095.2
• 申請日: 2016-01-18
• 公開（公告）號: CN105567685B
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發(fā)明（設計）人: 唐克軒;付雪晴;石璞;劉萌;沈乾;顏廷祥;唐岳立;黎凌;孫小芬
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;A01H6/14
• 代理公司: 上海旭誠知識產(chǎn)權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

1.一種啟動子，其特征在于，所述啟動子是能調(diào)控基因在非分泌型腺毛中特異表達，其核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。

2.如權利要求1所述的啟動子的應用，其特征在于，在利用植物非分泌型腺毛組織表達和生產(chǎn)代謝產(chǎn)物的基因工程育種中的應用；所述植物為青蒿。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述代謝產(chǎn)物為青蒿素。

4.一種載體，其特征在于，所述載體連接有如權利要求1所述的啟動子。

5.一種制備高產(chǎn)青蒿素的轉(zhuǎn)基因青蒿的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、根據(jù)青蒿基因組中AaPDR3基因啟動子序列，利用巢式PCR克隆如權利要求1中所述的啟動子的序列；

步驟二、將步驟一中獲得的AaPDR3基因的所述啟動子的序列連入pCAMBIA1391z載體，獲得pCAMBIA1391Z-proAaPDR3載體；

步驟三、將步驟二中獲得的pCAMBIA1391Z-proAaPDR3載體轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌；

步驟四、將步驟三中獲得的帶有pCAMBIA1391Z-proAaPDR3載體的根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化青蒿，并進行檢測；

步驟五、確定所述啟動子所引導的GUS報告基因在植株中的表達部位。

6.根據(jù)權利要求5所述的制備高產(chǎn)青蒿素的轉(zhuǎn)基因青蒿的方法，其特征在于，所述啟動子與青蒿素合成途徑中的關鍵酶基因融合。

7.根據(jù)權利要求5所述的制備高產(chǎn)青蒿素的轉(zhuǎn)基因青蒿的方法，其特征在于，所述巢式PCR的引物序列為：

第一輪PCR：PF1：5’-CTTTTCCAGCCAAATAAGTATGCCG-3’；

PR1：5’-TTCTTCCACTATTGCTCCCTAACCT-3’；

第二輪PCR：PF2：5’-TTTCTTTGGTGTTGTATCAATCTCTG-3’；

PR2：5’-TTCTTCCACTATTGCTCCCTAACCT-3’；

為構建pCAMBIA1391z-proAaPDR3載體，proAaPDR3兩端分別引入了EcoRI的酶切位點和NcoI的酶切位點，使用的引物序列為：

EcoRI-Pro-PDR3-FP：5’-CGGAATTCGAACTGTTGAATTAGTATTTAC-3’；

Pro-PDR3-NcoI-RP：5’-CATGCCATGGTTTTAATGCTCAAAAAGCCC-3’。

8.一種表達盒，其特征在于，所述表達盒包括如權利要求1所述的啟動子。