[發(fā)明專利]一種同時檢測蔬菜中多種抗生素殘留的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610031006.4
• 申請日: 2016-01-19
• 公開（公告）號: CN105675780B
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李兆君;張文娟;劉元望;馮瑤;張彩月;魏朝俊;成登苗;章程
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種同時檢測蔬菜中多種抗生素殘留的方法，其特征在于通過對蔬菜樣品中11種抗生素的有效提取和純化，在液相色譜和質(zhì)譜條件下利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時對其中多種抗生素含量進行檢測；具體步驟如下：

(1)將采集回的蔬菜樣品冷凍干燥后，磨碎后過2mm篩；稱取1g過篩樣品與10ml的乙腈和鹽酸混合溶液提取劑混合，在渦旋儀上震蕩30s后超聲15min，在轉(zhuǎn)速為8000rpm的條件下離心15min，倒出并保留上清液；再將沉淀與10ml提取劑混合后再渦旋儀上震蕩30s后超聲15min，在轉(zhuǎn)速為8000rpm的條件下離心15min，將兩次上清液合并得到抗生素提取液；

(2)將抗生素提取液通過0.45μm的尼龍濾膜，將過膜后提取液使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至3-5ml，濃縮后的提取液通過活化后的HLB柱進行富集，用超純水淋洗HLB柱去除部分雜質(zhì)，并抽干5min，再用洗脫劑洗脫HLB柱得到抗生素洗脫液，所述的洗脫劑是乙腈和鹽酸的混合液，二者的體積比例為99∶1；

(3)將抗生素洗脫液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，用初始流動相定容至1ml，再用孔徑為0.22μm的尼龍針頭濾器過濾后得到待測液；

(4)利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對待測液中11種抗生素的含量進行檢測；

①色譜條件：色譜柱：150mm×4.6mm，3.5μm；流動相A為0.1％甲酸溶液，流動相B為乙腈；流速為0.3ml/min；進樣體積5μl；柱溫35℃；梯度洗脫順序：0～11min，80％A；11～16min，80％～40％A；16～18min，40％～80％A；18～28min，80％A；

②質(zhì)譜條件：離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正/負離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；干燥氣溫度和流速：300℃，10.0L/min；霧化氣壓力：20.0psi；毛細管電壓：3800V；

表1. 11種目標抗生素的質(zhì)譜參數(shù)

所述11種抗生素包括土霉素、金霉素、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺噻唑、磺胺間甲氧嘧啶、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、泰樂菌素、氯霉素。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測蔬菜中多種抗生素殘留的方法，其特征在于乙腈和鹽酸混合溶液提取劑中乙腈和鹽酸的比例為125∶4。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測蔬菜中多種抗生素殘留的方法，其特征在于所述的HLB柱容積為6ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測蔬菜中多種抗生素殘留的方法，其特征在于所述的HLB柱的活化方法是：先用5ml甲醇自然通過新的HLB柱，再用10ml去離子水分兩次自然過柱。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測蔬菜中多種抗生素殘留的方法，其特征在于濃縮后的提取液通過活化后的HLB柱的流速為1ml/min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測蔬菜中多種抗生素殘留的方法，其特征在于所述的洗脫劑洗脫HLB柱時的速度為1ml/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測蔬菜中多種抗生素殘留的方法，其特征在于所述初始流動相為0.1％甲酸溶液和乙腈的混合液，二者的體積比例為8∶2。