[發(fā)明專利]一種獲取剪切場下單個(gè)聚合物分子熒光發(fā)射光譜信息的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610031002.6
• 申請(qǐng)日: 2016-01-18
• 公開（公告）號(hào): CN105675560B
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭鍇鍇;楊京法;趙江
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院化學(xué)研究所;中國科學(xué)院大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;王春霞

1.一種獲取剪切場下單個(gè)聚合物分子熒光發(fā)射光譜信息的方法，包括如下步驟：

(1)配制濃度為10nM以下的聚合物溶液，將熒光分子探針標(biāo)記在聚合物分子上；

(2)在施加剪切場的同時(shí)，激光照射經(jīng)標(biāo)記的聚合物溶液，收集發(fā)射出的熒光信號(hào)，即得單個(gè)聚合物分子的熒光發(fā)射光譜信息；所采用的測量系統(tǒng)包括：

一用于作為激發(fā)光照射待測樣品的激發(fā)光源單元；

一用于對(duì)待測樣品施加機(jī)械剪切同時(shí)測量其宏觀流變學(xué)特性的剪切施加與流變測量單元，所述剪切施加與流變測量單元底部設(shè)置一激發(fā)光光學(xué)窗口；以及

一光學(xué)顯微單元，所述光學(xué)顯微單元用于將所述激發(fā)光源單元出射的激發(fā)光經(jīng)所述激發(fā)光光學(xué)窗口引入到位于剪切場下的待測樣品，使得待測樣品受激發(fā)產(chǎn)生熒光信號(hào)，并將產(chǎn)生的熒光信號(hào)收集發(fā)射到一單分子熒光發(fā)射光譜測量單元；所述單分子熒光發(fā)射光譜測量單元用于獲取熒光信號(hào)，得到單個(gè)聚合物分子的熒光發(fā)射光譜信息；

所述測量系統(tǒng)中，所述光學(xué)顯微單元采用倒置熒光顯微鏡結(jié)構(gòu)，包括一顯微鏡物鏡、一二向色鏡、一反射鏡、一發(fā)射光高通濾波片、一激發(fā)光帶通濾波片、一狹縫和一聚焦透鏡，所述激發(fā)光經(jīng)所述顯微鏡物鏡發(fā)射到位于所述剪切施加與流變測量單元內(nèi)部的待測樣品，經(jīng)待測樣品激發(fā)的熒光經(jīng)所述顯微鏡物鏡收集后發(fā)射到所述二向色鏡，經(jīng)所述二向色鏡出射的熒光信號(hào)經(jīng)所述濾波片發(fā)射到所述反射鏡，經(jīng)所述反射鏡反射的熒光經(jīng)所述聚焦透鏡和狹縫發(fā)射到所述單分子熒光發(fā)射光譜測量單元；另外，所述激發(fā)光源單元的出射端設(shè)置所述激發(fā)光帶通濾波片。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述測量系統(tǒng)中，所述剪切施加與流變測量單元采用轉(zhuǎn)矩流變儀，所述轉(zhuǎn)矩流變儀下基板設(shè)置所述激發(fā)光光學(xué)窗口。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述測量系統(tǒng)中，所述激發(fā)光源單元采用連續(xù)激光或飛秒脈沖激光；所述激發(fā)光源單元包括一個(gè)以上不同波長的激光器、若干反射鏡、若干光闌、第一擴(kuò)束鏡和第二擴(kuò)束鏡，所述第二擴(kuò)束鏡的入射端設(shè)置一中性密度濾波片，所述激光器發(fā)出的光分別經(jīng)若干所述反射鏡和所述光闌并依次經(jīng)所述第一擴(kuò)束鏡和第二擴(kuò)束鏡進(jìn)行兩級(jí)擴(kuò)束將激發(fā)光束直徑擴(kuò)大以確保其尺寸大于所述光學(xué)顯微單元的顯微鏡物鏡進(jìn)光孔。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述聚合物為DNA；所述熒光分子探針為熒光染料。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述聚合物為人體單鏈DNA i-motif片段，序列為5’-CCCTAACCCTAACCCTAACCC-3’；所述熒光分子探針為Oregon Green 514。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法在所述標(biāo)記之前還包括在DNA分子的5’端修飾的NH2-(CH2)6-步驟。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述標(biāo)記中，所述DNA與所述熒光染料的摩爾比為1：(3～7)。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：DNA溶液的溶劑為pH為8.2～8.4的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述標(biāo)記在避光的條件下進(jìn)行，溫度為20～30℃，時(shí)間為8～14h。