[發明專利]一種水產品中生物胺的快速檢測方法

有效

• 申請號: 201610030290.3
• 申請日: 2016-01-18
• 公開（公告）號: CN105651890B
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發明（設計）人: 干寧;黃潔;歐昌榮;湯海青;張利;曹玉廷;李天華;林賽釵;劉海波
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 杭州千克知識產權代理有限公司33246
• 代理人: 單燕君,趙芳

1.一種水產品中生物胺的快速檢測方法，其特征在于，具體包括以下步驟:

（1）從水產品中萃取生物胺，并將其制備成生物胺稀溶液；

（2）在固相微萃取萃取頭上浸涂一層衍生化試劑；衍生化試劑為氯甲酸異丁酯；氯甲酸異丁酯與異辛烷的重量比為0.2-1:13；

（3）用步驟（2）處理后的萃取頭直接衍生/萃取步驟（1）得到的生物胺稀溶液中的生物胺，得到生物胺衍生物；

（4）將步驟（3）得到的生物胺衍生物利用氣相質譜進行分析；

（5）根據內標化合物校正峰面積后，建立生物胺含量與生物胺衍生物峰面積定量關系的標準曲線；

（6）按照上述步驟（1）-（4）獲得待測樣品中生物胺衍生物的峰面積，根據步驟（5）生物胺含量與生物胺衍生物峰面積的定量關系，計算得到水產品中生物胺的含量。

2.根據權利要求1所述的一種水產品中生物胺的快速檢測方法，其特征在于，所述步驟（1）將萃取液得到的生物胺采用鹽酸溶解，并將該溶液調節pH為9-11。

3.根據權利要求2所述的一種水產品中生物胺的快速檢測方法，其特征在于，所述步驟（1）的具體步驟為：

a將水產品勻漿后稱取5-20g，用5wt%三氯乙酸提取生物胺，將提取液用5wt%的三氯乙酸稀釋后濾紙過濾；

b采用正己烷對濾液進行除脂；

c向萃取液中加入氧化鈉并使其濃度達到重量百分比為10% 以上，調節pH為11-12，并用1:1的正丁醇-三氯甲烷溶液萃取；

d將萃取液烘干后的殘留物即生物胺用0.1M的鹽酸溶解，每g水產品的鹽酸使用量為1-4ml；

e鹽酸溶液加入氯化鈉并使其濃度達到質量百分比為5%以上，并調節pH為9-11。

4.根據權利要求1所述的一種水產品中生物胺的快速檢測方法，其特征在于，所述衍生試劑中還加入N,N-二乙基乙胺，N,N-二乙基乙胺與衍生化試劑的比為0.5-1:1。

5.根據權利要求1所述的一種水產品中生物胺的快速檢測方法，其特征在于，所述步驟（3）將萃取頭浸入生物胺稀溶液中進行同步衍生/萃取生物胺時，在500-900rpm下攪拌30-60min；在將萃取頭操作結束之后，去除萃取頭上的水分。

6.根據權利要求1所述的一種水產品中生物胺的快速檢測方法，其特征在于，所述步驟（4）的具體條件是：氣相色譜分析條件:島津氣相色譜儀；色譜柱:Rxi-5ms 30m×0.25mm×0.25μm；進樣口溫度270℃，不分流模式進樣；質譜接口溫度280℃，離子源溫度230℃；色譜柱柱溫:100℃，保持1.2min；然后以10℃ /min的速度升溫至160℃，再以25℃ /min的速度升溫至280℃，保留5min。

7.根據權利要求1所述的一種水產品中生物胺的快速檢測方法，其特征在于，所述步驟（5）中使用的內標化合物為1,7-二氨基庚烷；標準曲線的建立采用內標法，具體為：首先，在樣品中加入不同濃度的生物胺標準品和定量的內標化合物1,7-二氨基庚烷，然后，采用步驟（4）測出一系列不同濃度的生物胺標準品對應的峰面積，最后，根據內標化合物校正峰面積后，確定生物胺的含量與生物胺衍生物峰面積的定量關系，建立標準曲線。

8.根據權利要求1或2或3所述的一種水產品中生物胺的快速檢測方法，其特征在于，所述步驟（3）中操作前首先在生物胺稀溶液還加入5-8%的枸櫞酸鈉。