[發明專利]一種唾液酸酶Neu1在制備藥物方面的用途

在審

• 申請號: 201610029609.0
• 申請日: 2016-01-15
• 公開（公告）號: CN105617402A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 李想;關鋒;劉昌梅;翟延紅
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K38/47;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 耿曉岳

技術領域

本發明涉及一種唾液酸酶Neu1在制備藥物方面的用途，屬于藥物制備技術領域。

背景技術

膀胱癌是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，也是全身十大常見腫瘤之一。全球每年大約有43 萬人被診斷為膀胱癌，其中約17萬人死于膀胱癌，其致死率約為38％。膀胱癌在我國泌尿生 殖系腫瘤發病率中高居榜首，膀胱癌的發病率隨年齡增長而增加，高發年齡段為50-70歲。 男性膀胱癌發病率高于女性。膀胱癌患者經尿道電切術后，其復發率約為70％，一般術后膀 胱內灌注卡介苗或化療藥物可降低其復發率。常用的灌注化療藥物有絲裂霉素、阿霉素、噻 替派、羥基喜樹堿等。

目前在哺乳動物體內共發現了4種唾液酸酶(Neuraminidases，NA)，其中Neu1最為保 守，主要定位于溶酶體，其功能是特異識別低聚糖和糖蛋白中的糖苷鍵，并對其進行剪切。 唾液酸酶抑制劑可抑制人皮膚成纖維細胞、主動脈平滑肌細胞金額耳軟骨細胞中彈性纖維的 組裝，并引起彈性纖維的合成受損。在過去的40年中，細胞表面糖蛋白唾液酸的修飾情況常 作為區分不同腫瘤的標志，因此唾液酸也被認為是潛在的癌癥治療靶點，Neu1作為可水解唾 液酸的酶也受到高度關注。有研究者對多株小鼠結腸腺癌細胞分析，發現惡性程度較高的細 胞株中Neu1表達明顯低于良性細胞株，然而該研究僅限于表達量的分析，并沒有進一步數 據表面其與結腸腺癌之間的關系，由于生物機體的性能受到大量基因的相互作用與影響，所 以Neu1與結腸腺癌的關系尚未可知。

由于膀胱癌的發病率居高不下，并且復發率很高，開發有效治療膀胱癌的藥物是目前亟 需解決的問題。

發明內容

為了克服上述問題，本發明提供了一種唾液酸酶Neu1的新用途，是首次報道Neu1在有 效治療膀胱癌中的應用。本發明的有效的蛋白Neu1，通過質粒構建，轉染至膀胱癌細胞中， 引起相關通路的激活或抑制，并用實驗數據表明該蛋白對膀胱癌的治療具有一定的治療效果。

本發明的唾液酸酶Neu1，其氨基酸序列如(a)或(b)所示：

(a)氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；

(b)在(a)的基礎上發生氨基酸插入、缺失或者替換得到的氨基酸序列，且編碼有活 性的唾液酸酶。

所述唾液酸酶Neu1的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。

本發明提供了所述唾液酸酶Neu1在制備藥物方面的應用；是用來制備抑制膀胱癌細胞 遷移或者增殖的藥物。

在本發明的一種實施方式中，所述藥物是抗體。

在本發明的一種實施方式中，所述應用，是先將編碼氨基酸序列如SEQIDNO.1的唾液 酸酶Neu1基因，采用適合的表達載體和/宿主進行表達得到唾液酸酶Neu1，然后再用于制備 藥物。

在本發明的一種實施方式中，所述表達載體為真核表達載體。

在本發明的一種實施方式中，所述藥物，可以在膀胱癌的治療中可通過膀胱灌注的方法 使用，以達到抑制膀胱癌的效果。

本發明還提供表達唾液酸酶的轉基因細胞系或者基因工程菌在制備抑制膀胱癌細胞遷移 和/或增殖的藥物方面的應用。

在本發明的一種實施方式中，所述唾液酸酶Neu1的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。

本發明的有益效果：發現了一種唾液酸酶Neu1的新用途，是首次報道Neu1在有效治療 膀胱癌中的應用。本發明的唾液酸酶對α2,3及α2,6連接形式的底物均能進行水解，對細胞表 明的FN進行轉化，同時首次發現該酶能夠通過將癌細胞表面因子纖連蛋白FN的唾液酸去掉 導致FN的降解，而抑制膀胱癌細胞的增殖能力。本發明的有效的蛋白Neu1轉染至膀胱癌細 胞中，可引起相關通路的激活或抑制，實驗數據表明該蛋白對膀胱癌的治療具有一定的治療 效果。

附圖說明

圖1為YTS-1/Neu1和YTS-1中Neu1的表達情況；

圖2為YTS-1/Neu1和YTS-1細胞中唾液酸水平的差異；

圖3為YTS-1/Neu1和YTS-1細胞中唾液酸酶活性的差異；

圖4為膀胱癌細胞YTS-1中過表達Neu1蛋白后FN蛋白表達的變化；

圖5為膀胱癌細胞YTS-1中過表達Neu1蛋白后細胞增殖能力的變化；