[發明專利]一種產麥角甾醇內生真菌及其應用

有效

• 申請號: 201610027044.2
• 申請日: 2016-01-15
• 公開（公告）號: CN105505798B
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發明（設計）人: 鄭承劍;秦路平;李秀清;韓婷;辛海量;張巧艷;蔣益萍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P33/00;C12R1/645
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 趙青

本發明涉及微生物技術領域，具體是一種內生真菌在制備麥角甾醇中的應用，所述的內生真菌是從唇形科鼠尾草屬植物丹參植物活體中采用內生真菌分離純化技術分離獲得的，分類命名為球狀莖點霉D14(Phoma glomerata)，保藏編號為CGMCC No.11305。本發明通過內生真菌菌株液體發酵，產生了麥角甾醇。本發明的丹參內生真菌是尋找麥角甾醇新資源的重要微生物，具有較大的應用價值。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，具體地說，是一種產麥角甾醇的內生真菌及其應用。

背景技術

維生素D2是哺乳動物生長發育所必需的脂溶性維生素，其主要生理功能是調節體內鈣磷代謝。在醫藥工業上，維生素D2是預防和治療佝僂病、齲齒及老年骨質疏松癥的重要藥品。麥角甾醇存在于酵母和一些植物中，是脂溶性維生素D2的前體，在紫外線照射下，轉化為維生素D2。從酵母細胞中提取麥角甾醇，然后用紫外線照射是生產維生素D2的主要方法。此外，麥角甾醇還是一種重要的醫藥化工原料，可用于“可的松”、“黃體酮”等藥物的生產。自從Tanret首次從麥角中分離到麥角甾醇以來，研究者們試圖通過生物技術方法獲得麥角甾醇，隨后便開始了對其分離、測定和高產菌株選育等方面的研究。目前，國內外用于生產麥角甾醇的酵母菌種主要采用以下選育方法獲得：

一是自然選育，對不同酵母菌種進行篩選，從中選出細胞麥角甾醇含量相對較高的菌種用于生產。

二是采用細胞雜交選育技術，將細胞麥角甾醇含量較高的酵母細胞與細胞生物量高的酵母細胞進行雜交，從雜交子代中篩選細胞生物量和細胞麥角甾醇含量都較高的雜交子代菌株。

三是采用誘變育種技術。由于常規的物理、化學等方法誘變隨機性較大，麥角甾醇高產菌的篩選又無快速簡便的初篩手段，且麥角甾醇含量測量非常費時，所以誘變育種的菌株選育工作量非常大。

四是原生質體融合技術。此方法可以突破雜交法的一些局限性，使具有不同優良性狀的單倍體菌株進行融合，獲得優于親本的融合子。

中國發明專利ZL 200410032719.X公開了一株產麥角甾醇酵母工程菌及其選育方法與應用，是啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ZGFH－88CGMCC No.1117，其選育方法包括：1)以啤酒酵母染色體DNA為模板，進行PCR擴增，得到編碼甾醇C－24(28)還原酶的ERG4基因；2)將PCR擴增得到的ERG4基因連接到載體質粒上，構建含有ERG4基因的重組質粒；3)用重組質粒轉化酵母菌株，篩選轉化子，獲得高產麥角甾醇的酵母工程菌株。發明所提供的生產麥角甾醇的方法，是對產麥角甾醇啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ZGFH－88CGMCC No.1117進行發酵，獲得麥角甾醇。發酵培養條件簡單，成本低廉，麥角甾醇產量高，具有實用性強、操作簡便等優點，易于普遍推廣，具有廣闊的實際應用前景。中國專利文獻CN104694401A公開了一種麥角甾醇5,8過氧化物的生產用菌株，該菌株LPPV001為純綠青霉Penicillium verrucosum，保藏號為CGMCC NO.4468，可以通過發酵產生麥角甾醇5,8過氧化物且產率極高，經簡單提純即可得到麥角甾醇5,8過氧化物純凈物。

但是關于一種能夠通過微生物發酵產生麥角甾醇的丹參內生真菌及其應用目前還未見報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能夠通過微生物發酵產生麥角甾醇的內生真菌及其應用。

本發明的第一方面，提供了一種內生真菌，命名為球狀莖點霉D14(Phomaglomerata)。