[發明專利]一種分離純化姬松茸子實體活性蛋白的方法

在審

• 申請號: 201610026939.4
• 申請日: 2016-01-18
• 公開（公告）號: CN106977592A
• 公開（公告）日: 2017-07-25
• 發明（設計）人: 孫鴻雁
• 申請（專利權）人: 臨沂格瑞食品有限公司
• 主分類號: C07K14/375
• 分類號: C07K14/375;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/16
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• 代理人: 暫無信息

1.一種分離純化姬松茸子實體活性蛋白的方法，其特征在于，包括下述步驟：

（1）干燥的姬松茸子實體粉脫脂后加入纖維素酶和果膠酶酶解細胞壁成分，控制酶解溫度50℃，酶添加量為2%，酶解時間為3h；

（2）將上述酶解后的溶液進行超聲波輔助提取，超聲波功率為250W，超聲波時間為35min；

（3）將上述經過酶解和超聲波處理的姬松茸子實體蛋白粉末進行熱水浸提，利用正交試驗優化對提取工藝具有顯著影響的因素；

（4）用硫酸銨飽和溶液沉淀鹽析姬松茸子實體活性蛋白，確定其飽和度為80%，將pH調至3.5，真空冷凍干燥，得姬松茸子實體粗蛋白；

（5）采用DEAE-52離子交換柱層析分離姬松茸子實體粗蛋白，采用考馬斯亮藍G250追蹤測定，收集洗脫液；

（6）采用SephadexG-150葡聚糖凝膠進一步純化姬松茸子實體粗蛋白，透析脫鹽，真空冷凍干燥，得純度較高的姬松茸子實體活性蛋白；

（7）采用SDS-PAGE測定姬松茸子實體活性蛋白分子量。

2.根據權利1所述的分離純化姬松茸子實體活性蛋白的方法，其特征在于，采用正交試驗優化姬松茸子實體活性蛋白的提取工藝的步驟如下：在實驗確定酶解時間、酶添加量、超聲波功率、超聲波時間的基礎上，對浸提溫度、浸提時間、料液比、提取次數進行四因素三水平的正交試驗優化，分析各因素對提取率的影響。

3.根據權利2所述的分離純化姬松茸子實體活性蛋白的方法，其特征在于，采用飽和硫酸銨沉淀鹽析姬松茸子實體活性蛋白的步驟如下：向姬松茸蛋白提取液中加入硫酸銨溶液至不同的飽和度，4℃靜置鹽析24h，離心，用PBS磷酸鹽溶液溶解沉淀物，透析后凍干，確定硫酸銨溶液的最適的飽和度。

4.根據權利3所述的分離純化姬松茸子實體活性蛋白的方法，其特征在于，采用DEAE-52離子交換柱層析初分離姬松茸子實體活性蛋白的步驟如下：用磷酸鈉緩沖液平衡層析柱，將姬松茸蛋白粗提液上柱，吸附平衡后，用磷酸鈉緩沖液分步洗脫，流速為0.5mL/min；采用考馬斯亮藍G250進行追蹤測定，根據梯度洗脫曲線收集合并洗脫液。

5.根據權利4所述的分離純化姬松茸子實體活性蛋白的方法，其特征在于，采用Sephadex G150葡聚糖凝膠純化姬松茸子實體活性蛋白的步驟如下：用磷酸鈉緩沖液平衡SephadexG150葡聚糖凝膠柱，吸附平衡后，用磷酸鈉緩沖液進行分步洗脫，流速為0.5mL/min；采用考馬斯亮藍G250進行追蹤測定，根據梯度洗脫曲線收集合并洗脫液。