[發明專利]定向誘導絨山羊毛囊干細胞向毛囊細胞分化的方法

有效

• 申請號: 201610026812.2
• 申請日: 2016-01-13
• 公開（公告）號: CN105462914B
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 高峰;劉迎春;周歡敏;曹春花;吳凱峰
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/074
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍

本發明公開了一種定向誘導絨山羊毛囊干細胞向毛囊細胞分化的方法，屬于絨山羊毛囊干細胞的誘導分化領域。本發明通過向絨山羊毛囊干細胞中加入不同濃度的褪黑素進行誘導，發現濃度為500pg/ml的褪黑素可以有效的促進毛囊干細胞向毛囊細胞分化。在整個誘導期，500pg/ml的褪黑素僅會誘導分化得到毛囊細胞，而不會誘導產生表皮細胞，而且誘導14d的分化效率最佳。本發明建立的外源褪黑素定向誘導絨山羊毛囊干細胞向毛囊細胞高效分化的方法，不僅操作簡便，可重復性好，而且對毛囊干細胞的體外培養，尤其是對于毛囊干細胞體外高效定向誘導的命運決定等相關研究及應用具有重要的實際意義。

技術領域

本發明涉及絨山羊毛囊干細胞，尤其涉及定向誘導絨山羊毛囊干細胞向毛囊細胞分化的方法，屬于絨山羊毛囊干細胞的誘導分化領域。

背景技術

毛囊來源干細胞(hair follicle stem cells，FSC)是指存在于毛囊里的原始細胞，它可以在體內外分化為不同類型的細胞。目前多數研究將定位于毛囊隆突部和外根鞘的角質形成干細胞稱為毛囊干細胞(Yasuyuki et x1.,Implanted hair follicle stemcells form Schwann cells that support repair of severed peripheral nerves[J].PNAS,2005,102(49):17734-17738.)。毛囊干細胞在光鏡下觀察呈立方形，體積偏小，折光性能強，細胞大小較為均一，整體呈鋪路石狀生長，細胞核質比較大，有3-5個核仁，具有幼稚細胞的形態特征。毛囊干細胞在體內大多處于靜息的狀態，一旦微環境發生改變，就會表現出驚人的增殖能力。許多研究人員己經采用不同的方法分離得到了毛囊干細胞，其方法主要有：流式細胞儀分選法、應用酶消化法、組織塊法、差速貼壁法、顯微分離法和免疫磁珠法等。

褪黑素(melatonin,MLT)主要由哺乳動物及人類的松果體產生，是一種吲哚類化合物/胺類激素，其分泌量晝夜不同，白天分泌量減少，夜晚分泌量增加。褪黑素學名為N-乙酸-5-甲氧基色胺，分子式C₁₃H₁₆N₂O₂，相對分子質量為232.27，熔點116-118℃，是一種部分親水性和高親脂性的化合物，屬中性偏弱酸性，不溶于水，溶于乙醇、乙醚、丙酮等有機溶劑，受熱易分解，產品性狀為白色或淡黃色結晶狀粉末。研究表明，不論在山羊生絨期還是非生絨期，皮下埋置褪黑激素都可以促進絨毛的生長。

目前，關于褪黑素對毛囊來源干細胞分化的影響尚未見報道。因此，建立一種外源褪黑素定向誘導絨山羊毛囊干細胞向毛囊細胞高效分化的方法，對于毛囊干細胞體外高效定向誘導的命運決定等相關研究將具有重要的意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種定向誘導絨山羊毛囊干細胞向毛囊細胞分化的方法，該方法利用褪黑素定向誘導絨山羊毛囊干細胞向毛囊細胞高效分化，操作簡便，可重復性好，為毛囊干細胞體外培養及研究應用的開展奠定了基礎。

為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是：

本發明首先公開了一種定向誘導絨山羊毛囊干細胞向毛囊細胞分化的方法，包括：向絨山羊毛囊干細胞中加入褪黑素進行誘導，然后對誘導分化的細胞進行鑒定，即得；其中，所述褪黑素的使用濃度為100-700pg/ml；優選的，所述褪黑素的使用濃度為500-700pg/ml，最優選為500pg/ml。本發明所述誘導的時間為1-21天，優選為7-21天，最優選為14天。本發明所述絨山羊毛囊干細胞為內蒙古白絨山羊毛囊干細胞。