[發(fā)明專利]一種番紅花藥材DNA的提取方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610025156.4 | 申請日： | 2016-01-15 |
| 公開（公告）號： | CN105462962A | 公開（公告）日： | 2016-04-06 |
| 發(fā)明（設計）人： | 龍春林;黃衛(wèi)娟 | 申請（專利權）人： | 中央民族大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京東正專利代理事務所(普通合伙) 11312 | 代理人： | 蔡仲德 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 番紅花 藥材 dna 提取 方法 | ||
1.一種番紅花藥材DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)采用番紅花干燥柱頭，取20mg樣品置于1.5mL離心管中，加入液氮充分研磨1-3min；
(2)加入600-800μL預熱的4×CTAB與等體積的氯仿異戊醇，旋渦振蕩3min，充分混勻， 10000-13000rpm離心5-8min，吸取上清液于另一離心管中；
(3)加入2倍體積的預冷無水乙醇和0.2倍體積的NaAc，沉淀DNA30-60min后， 10000-13000rpm離心8min，棄上清液；
(4)用2.5倍體積的無水乙醇洗滌DNA2～3次；
(5)將樣品DNA在超凈工作臺上吹干后，加入100μLTE緩沖液，將樣品保存在-20℃冰箱 備用；
(6)用瓊脂糖和1×TAE溶液制備0.5％瓊脂糖凝膠，點樣后進行45min電泳，再在凝膠成像 分析系統(tǒng)下檢測。
2.根據(jù)權利要求1所述的番紅花藥材DNA的提取方法，其特征在于，所述的氯仿異戊醇中 氯仿和異戊醇的體積比為24:1。
3.根據(jù)權利要求1所述的番紅花藥材DNA的提取方法，其特征在于，所述的4×CTAB包含 以下組分：質(zhì)量百分含量為4％的溴化十六烷基三甲基銨、0.2mol/L的Tris-HCl、2MNaCl、 質(zhì)量百分含量為1％的聚乙烯聚吡咯烷酮、20mMEDTA。
4.根據(jù)權利要求3所述的番紅花藥材DNA的提取方法，其特征在于，所述Tris-HCl的pH 值為8.0，所述EDTA的pH值也為8.0。
5.根據(jù)權利要求3或4所述的番紅花藥材DNA的提取方法，其特征在于，所述的4×CTAB 用蒸餾水定容至1L，滅菌，且在使用前加入2mLβ-巰基乙醇。
6.根據(jù)權利要求1所述的番紅花藥材DNA的提取方法，其特征在于，所述的TE緩沖液組 分為：10mMTris-HCl，1mMEDTA；pH＝8.0。
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