[發明專利]一種火木層孔菌株及其應用

在審

• 申請號: 201610024794.4
• 申請日: 2016-01-14
• 公開（公告）號: CN105524846A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 王克柳;王美海
• 申請（專利權）人: 山東魯北藥業有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P19/04;C12R1/645
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

1.一種火木層孔菌株(Phellinusigniarius)，其保藏號為：CGMCCNO.11737。

2.如權利要求1所述的火木層孔菌株在生產桑黃多糖中的應用。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

步驟(1)將所述火木層孔菌株的菌絲體加入水中，菌絲體和水的質量比為1:10-50， 然后將溫度升到50-90℃，提取1-4h得到提取液；

步驟(2)對提取液進行超濾分離，超濾分離采用用PS-4020中空纖維膜，流速為3～ 5L/h，壓力為0.10～0.15MPa，得到透過液；

步驟(3)取桑黃發酵液加入1-3倍體積的乙醇，沉淀9～15h；離心去掉上清液，沉淀 物溶解于蒸餾水中，放入透析袋中透析2d，每10～12h換水一次；將透析物于50℃干燥20～ 24h制得胞外多糖；

步驟(4)將所述胞外多糖與所述透過液混合后經過Sevag法脫蛋白以及取Sephadex 進行凝膠層析進一步純化制得桑黃多糖。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述步驟(4)中，所述Sevag法脫蛋白 的具體過程為：于所述胞外多糖與所述透過液的混合液中加入Sevag溶液，混合液和Sevag 溶液的體積比為l：l，振蕩時間為15min，用4～5倍體積95％乙醇沉淀24h，液體離心10min， 棄去上清液；其中所述Sevag溶液中氯仿和正丁醇的體積比為10：3，。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述Sephadex凝膠層析的具體過程為： 取Sephadex進行凝膠層析，加100ml蒸餾水室溫溶脹72～78h；待溶脹平衡后，傾去上層 清液，包括細顆粒，然后再放些蒸餾水攪亂，靜置使凝膠下沉，再傾去上層清液，至無細 顆粒為止，溶脹平衡和漂洗凈的凝膠除去氣泡，取2.6x100cm層析柱裝柱，柱中洗脫加入 少量洗脫液，使高出床表面3-5cm，接上恒壓洗脫瓶，調節操作壓在30cmH20以內；收 集洗脫流出液，烘干后得桑黃多糖。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述步驟(1)中，培養所述火木層孔菌 株以制備得到菌絲體，培養過程中，種子培養基的各組分按重量百分比計：葡萄糖1-2％， 酵母浸粉1-2％，蛋白胨1-2％，麥芽糖0.5-1％，硫酸鎂0.05-0.1％，磷酸二氫鉀0.05％， PH值為5.0-5.5；發酵培養基配方：麥麩濃度35-45g/L，葡糖糖30-40g/L，蛋白胨1.0-2.0g/L， 硫酸鎂0.5-1.5g/L，磷酸二氫鉀0.1-0.3g/L，PH值為4.5-5.5。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述步驟(1)中，培養所述火木層孔菌 株的具體過程為：

步驟①對所述火木層孔菌株進行搖瓶培養，搖瓶培養基為所述種子培養基，在 24-26℃，120rpm振蕩培養72-90h，得到搖瓶菌種；

步驟②對搖瓶菌種進行搖瓶擴大培養，搖瓶擴大培養基為所述種子培養基，在 24-26℃，120rpm振蕩培養24-36h，得到擴大搖瓶菌種；

步驟③對擴大搖瓶菌種進行一級種子培養，一級種子培養基為所述種子培養基，培養 溫度為24-26℃，通氣量與一級種子培養基的體積比為1:0.3-0.8，通氣壓力為0.6-1.0kPa， 轉速為100r/min，培養36-45h，得到一級種子；

步驟④對一級種子進行二級種子培養，二級種子培養基為所述種子培養基，培養溫度 為24-26℃，通氣量與二級種子培養基的體積比為1:0.3-0.8，通氣壓力為0.6-1.0kPa，轉 速為100r/min，培養40-60h，得到二級種子；

步驟⑤對二級種子進行發酵培養，發酵所采用的培養基為所述發酵培養基，培養溫度 為24-26℃，通氣量與發酵所采用的培養基的體積比為1:0.3-0.8，通氣壓力為0.3～0.8kPa， 初始轉速為100r/min，通過調整轉速控制溶氧值在60％，培養90-120h。