[發明專利]T型鈣離子通道抑制劑NNC55-0396在制備抗神經退行性疾病藥物中的應用

在審

• 申請號: 201610024789.3
• 申請日: 2016-01-14
• 公開（公告）號: CN105534977A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發明（設計）人: 閆兵;陳茜;穆巖;張秋;翟淑梅;江翠娟
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: A61K31/4184
• 分類號: A61K31/4184;A61P25/28
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 王緒銀

技術領域

本發明涉及一種T型鈣離子通道抑制劑NNC55-0396(CAS:357400-13-6)在制備抗 神經退行性疾病藥物中的應用；屬生物醫學領域。

背景技術

細胞自噬是生物體內一種用于清除功能異常的細胞器、錯誤折疊的蛋白質、被氧化 的脂類等有害大分子物質的重要途徑。它的機制從低等生物酵母到高等的哺乳動物都高 度保守，對維持正常的生命活動至關重要。細胞自噬包括三種方式，即巨自噬 (macroautophagy)、微自噬(microautophagy)及伴侶分子介導的自噬(chaperone-mediated autophagy)。由于大自噬是自噬的主要途徑，故本文所述及的自噬均僅指大自噬。

錯誤折疊的蛋白質若不能被有效清除，就會造成積聚，致使神經細胞功能喪失乃至 死亡，這是神經退行性疾病包括阿爾茨海默癥(Alzheimer'sdisease,AD)的主要原因。 阿爾茨海默癥(AD)的主要特征是β-淀粉樣蛋白(Aβ)的積聚。細胞內Aβ的產生和清 除對阿爾茨海默癥的發病顯得十分重要。在阿爾茨海默癥中，細胞自噬受到損傷，核內 質溶酶體途徑出現異常。而自噬的藥理學活化作用可以促進Aβ的清除，進而減輕AD癥 狀，因此研究調控自噬對阿爾茨海默癥的早期干預有重要意義(劉知學等，2012)。

化合物NNC55-0396(CAS:357400-13-6)是藥物Mibefradil的衍生物，是一種高選 擇性的T型鈣離子通道抑制劑，廣泛應用于腫瘤、糖尿病等研究，也有研究發現其與胚 胎神經發育相關。但是NNC55-0396對于誘導細胞自噬，用于制備抗神經退行性疾病藥 物方面的研究，經權威機構檢索查新，目前國內外尚未見報道。鑒于此，研究化合物 NNC55-0396對誘導細胞自噬、改善認知功能障礙，制備抗神經退行性疾病藥物中的應用 具有重要意義。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明要解決的問題是提供一種T型鈣離子通道抑制劑 NNC55-0396(CAS:357400-13-6)在制備抗神經退行性疾病藥物中的應用。

本發明所述T型鈣離子通道抑制劑NNC55-0396在制備抗神經退行性疾病藥物中的 應用。

其中：所述T型鈣離子通道抑制劑NNC55-0396的化學結構如通式(I)所示，其化學 命名為：(1s,2s)-2-(2-(N-[3-(2-1H-苯并咪唑基)丙基]-N-甲胺基)乙基)-6-氟-1,2,3,4-四氫-1- 異丙基-2-萘酚-環丙基甲酸酯；所述神經退化性疾病優選是阿爾茲海默病。

本發明運用野生型神經膠質細胞U87MG細胞及LC3被綠色熒光蛋白(GFP)轉染的神 經膠質細胞U87MG細胞(簡稱LC3-GFP-U87細胞)，對T型鈣離子通道抑制劑 NNC55-0396進行了在影響細胞自噬及其關聯的認知功能障礙等疾病方面的研究，證實： 所述T型鈣離子通道抑制劑NNC55-0396在增強細胞自噬來改善認知功能障礙中具有明 顯作用，并確定所述T型鈣離子通道抑制劑NNC55-0396能有效誘導引發細胞自噬的濃 度為5μM。

為了更好的理解本發明的實質及本發明所述化合物的作用，下面結合NNC55-0396 的藥理實驗及結果，來進一步闡述其在增強細胞自噬中的作用。

神經膠質瘤細胞的制備：以常規方法培養野生型神經膠質細胞U87MG細胞及LC3 被綠色熒光蛋白(GFP)轉染的神經膠質細胞U87MG細胞(簡稱LC3-GFP-U87細胞)，收 集生長狀態良好的且處于對數期的細胞，備用。

采用細胞生物學和分子生物學方法進行如下實驗，以觀察NNC55-0396對 LC3-GFP-U87細胞和野生型神經膠質細胞U87MG自噬的影響。

1.綠色熒光蛋白-自噬過程特征蛋白GFP-LC3方法檢測細胞生長情況，以判斷 NNC55-0396對細胞自噬的影響

將處于對數生長期的LC3-GFP-U87細胞接種于96孔板中，經5μM的NNC55-0396 作用24小時后，用熒光倒置顯微鏡觀察LC3蛋白的變化，結果發現實驗組較對照組出 現大量熒光斑點，說明細胞產生自噬小體，LC3聚集在自噬小體內，形成熒光斑點，證 明了自噬的發生(見圖1)。