[發(fā)明專利]發(fā)酵法高密度培養(yǎng)小球藻生產(chǎn)工藝

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610024683.3
• 申請日: 2016-01-14
• 公開（公告）號(hào): CN105483014A
• 公開（公告）日: 2016-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李悅明;夏修巒;徐建春;崔建新;李霞;王道會(huì);遲慎麗;孫慧彬;趙守鵬;趙世寶;王彬;崔顯俊
• 申請（專利權(quán)）人: 青島科海生物有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/12
• 分類號(hào): C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 濟(jì)南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205
• 代理人: 張紅鳳

1.一種培養(yǎng)小球藻的生產(chǎn)工藝，其特征在于，依次包括以下步驟：

a選取優(yōu)質(zhì)小球藻藻種并將其活化，接種培養(yǎng)，使小球藻種子液的濃度在8～11g/L；

b異樣培養(yǎng)，包括四個(gè)階段：

b₁第一階段：將步驟a培養(yǎng)至生長對數(shù)期的小球藻種子液，接入150L的種子罐中進(jìn)行 異樣培養(yǎng)，其中，150L的種子罐中培養(yǎng)基組成如下：

葡萄糖：30-60g/L，硫酸鎂：0.5-1.6g/L，檸檬酸鈣：0.1-0.5g/L，磷酸鈉：1.0-2.0g/L， 磷酸氫二鉀：0.3-0.8g/L，硫酸亞鐵：0.05-0.1g/L，乙二胺四乙酸二鈉：0.3-0.6g/L，尿 素：3-8g/L，微量元素和水；

培養(yǎng)控制條件：

溫度：30-35℃，罐壓：0.03-0.08MPa，風(fēng)量：1.0-2.0vvm，DO≥20％，pH：5.5-7.5；

b₂第二階段：待第一階段小球藻種子液培養(yǎng)24～32h、碳源耗盡溶氧反彈且小球藻種子 液干重在20～25g/L、pH在6～7培養(yǎng)正常時(shí)，將其接種至1.5方罐中異樣培養(yǎng)；反之，重 新進(jìn)入第一階段培養(yǎng)；

該階段的培養(yǎng)基組成與第一階段種子罐中的培養(yǎng)基成分相同，并且，培養(yǎng)控制條件也與 第一階段培養(yǎng)控制條件相同；

b₃第三階段：待二階段小球藻種子液培養(yǎng)24～32h、碳源耗盡溶氧反彈且小球藻種子液 干重在20～25g/L、pH在6～7培養(yǎng)正常時(shí)，將其接種至17方罐中異樣培養(yǎng)；反之，重新進(jìn) 入第二階段培養(yǎng)；

該階段的培養(yǎng)基組成與第一階段種子罐中的培養(yǎng)基成分相同，并且，培養(yǎng)控制條件也與 第一階段培養(yǎng)控制條件相同；

b₄第四階段：待待三階段小球藻種子液培養(yǎng)24～32h、碳源耗盡溶氧反彈且小球藻種子 液干重在20～25g/L、pH在6～7培養(yǎng)正常時(shí)，將其接種至50方罐中異樣培養(yǎng)；反之，重新 進(jìn)入第三階段培養(yǎng)；

所述50方罐中的培養(yǎng)基分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基和流加培養(yǎng)基，所述流加培養(yǎng)基分為四次加入；

基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成如下：

葡萄糖：50-60g/L，硫酸鎂：0.8-1.6g/L，檸檬酸鈣：0.2-0.5g/L，磷酸鈉：1.0-2.0g/L， 磷酸氫二鉀：0.4-0.8g/L，硫酸亞鐵：0.08-0.1g/L，乙二胺四乙酸二鈉：0.3-0.6g/L，尿 素：3-8g/L，微量元素和水；

流加培養(yǎng)基的組成如下：

葡萄糖：200g/L，硫酸鎂：4g/L，檸檬酸鈣：1.5g/L，磷酸鈉：5g/L，磷酸氫二鉀：2g/L， 硫酸亞鐵：0.4g/L，乙二胺四乙酸二鈉：2g/L，尿素：15g/L，微量元素和水；

c誘導(dǎo)培養(yǎng)，

待第四階段培養(yǎng)至碳源耗盡、溶氧反彈時(shí)，進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，誘導(dǎo)溫度為30～35℃，罐壓： 0.04～0.06MPa，風(fēng)量：1.5～2.0vvm，尿素含量≥4g/L。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)小球藻的生產(chǎn)工藝，其特征在于：步驟b₁中，微量元素配 方為：硫酸錳：4.0-8mg/L，硫酸鋅：0.5-0.8mg/L，鉬酸：0.1-0.5mg/L，硫酸銅：0.1-0.8mg/L， 硼酸：10-15mg/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)小球藻的生產(chǎn)工藝，其特征在于：流加培養(yǎng)基的具體加入 方式為：當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)20～25h，且碳源耗盡、溶氧反彈、pH在6～7.5時(shí)，第一次加入流加培 養(yǎng)基；當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)32～38h，且碳源耗盡、溶氧反彈，pH在6～7.5時(shí)，第二次加入流加培養(yǎng) 基；當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)43～47h，且碳源耗盡、溶氧反彈，pH在6～7.5時(shí)，第三次加入流加培養(yǎng) 基；當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)53～57h，且碳源耗盡、溶氧反彈，pH在6～7.5時(shí)，第四次加入流加培養(yǎng) 基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)小球藻的生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟b₄中流加培養(yǎng)基中 微量元素的配方為：硫酸錳：25mg/L，硫酸鋅：2.5mg/L，鉬酸：1.5mg/L，硫酸銅：2.5mg/L， 硼酸：50mg/L。