[發明專利]一種黃精離體根莖的高效誘導方法

有效

• 申請號: 201610024403.9
• 申請日: 2016-01-14
• 公開（公告）號: CN105580734B
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 劉紅美;梁大勇;方小波;石建龍
• 申請（專利權）人: 遵義市龍馳生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司50219
• 代理人: 劉立春

技術領域

本發明涉及一種中藥材組織培養方法，尤其涉及一種黃精離體根莖的高效誘導方法。

背景技術

黃精是百合科多年生草本植物黃精(Polygonatum sibiricumRed)、滇黃精(P.kingianum Coll.eHtemsl.)或多花黃精(P.cyrtonemaHua)的根莖,具有潤肺滋陰,補中益氣,益腎填精的作用。近代研究表明,黃精含有煙酸、醒類、豁液質、淀粉、二氨基丁酸、黃精多糖及低聚糖等成分,有麻醉及降低動物血壓的作用,對腎上腺素引起的血糖過高有抑制作用,對防止動脈粥樣硬化及肝臟脂肪浸潤、對改善腎臟功能也有較好功效。黃精還是一味抗菌良藥,對傷寒桿菌、結核桿菌、金黃色葡萄球菌及皮膚癬菌等均有一定抑制作用。近年來,本品已廣泛應用于冠心病、高血壓、糖尿病、肺結核、再生障礙性貧血,以及預防放療、化療引起的副作用等,取得了較好的療效。隨著市場需求量不斷增加和野生資源不斷減少,黃精人工栽培已成為市場供求之主體。黃精繁殖方式主要是有性繁殖(種子)和無性繁殖(根莖)兩種方式。由于黃精種子難收集,種子發芽率低,而且種子繁殖,育苗時間又長,這樣就大大增加了黃精的栽培成本,不利于黃精的人工大面積種植。所以在當前的人工栽培中,繁殖主要依靠根莖的無性繁殖,但該方法繁殖系數低,種根莖用量大,既不經濟,又限制了黃精的產量潛力,不便栽植管理推廣。因此,黃精種苗問題成了人工大面積種植的瓶頸。而現有黃精栽培基地的黃精品種也迫切需要對其進行提純復壯,以培育高產抗病脫毒的種苗。

發明內容

為了解決根莖高效誘導方法上述技術問題，本發明采用了一種黃精離體高效誘導方法，解決了現有技術中黃精組培生產過程繁瑣復雜的程序，不適合大規模生產的問題，既保證不定芽的誘導率，又促使離體根莖的高效誘導，最終解決黃精資源保護和市場需求矛盾的問題。

一種黃精離體根莖的高效誘導方法，主要包括以下步驟：

(1)外植體的選擇：

選擇黃精帶芽根莖、嫩葉或葉柄作為外植體；

(2)不定芽的誘導培養：

不定芽誘導培養基為：MS+6-BA 1.0～4.0mg/L+2,4-D 0.1～0.5mg/L+白糖3％+瓊脂粉5g/L，pH 5.8～6.0；

將步驟(1)所得外植體接種在不定芽誘導培養基中，25～27℃、光照1200Lx、12h/d條件下培養35～40天；

(3)不定芽的增殖培養：

不定芽增殖培養基為：MS+6-BA 0.5～2.0mg/L+2,4-D 0.1～0.5mg/L+白糖3％+瓊脂粉5g/L，pH 5.8～6.0；

將步驟(2)所得分化有不定芽的塊莖切成直徑0.5cm大小，接種在不定芽增殖培養基中，25～27℃、光照1200Lx、12h/d條件下培養30～35天；

(4)離體根莖的誘導培養：

離體根莖誘導培養基：1/2MS+6-BA 0.3～1.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+白糖3％，pH5.8～6.0；

將步驟(3)所得不定芽接種于離體根莖誘導培養基中，25～27℃、光照1200Lx、12h/d條件下培養45～50天，在瓶內直接將帶不定芽塊莖誘導形成離體根莖；

(5)離體根莖的移栽或儲藏：

將步驟(4)所得離體根莖取出，洗凈粘附的培養基，陰干表面水分，直接進行大田移栽，或儲藏起來。

所述步驟(1)中的外植體優選帶芽根莖。

所述步驟(1)中的外植體在切斷之前經過滅菌處理。

所述步驟(2)、(3)、(4)中的培養基經過濕熱滅菌處理15～30min。

與現有技術相比較，本發明達到的有益效果為：本發明實現了將外植體誘導發生大量不定芽，并在瓶內能直接將帶不定芽塊莖誘導形成離體根莖，工藝簡單，誘導率高，增殖力強，離體根莖移栽成活率高，不需要生根培養和特殊馴化即可直接移栽大田或儲藏，能在短時間內生產出大量優質黃精種苗，具有較大的生產應用價值。本發明以兩種常用的植物生長調節劑進行不同濃度配比，經過固液培養，實現了高效的不定芽誘導和離體根莖的直接形成，不需要愈傷組織誘導、生根培養和馴化等常規繁瑣處理，就可將離體根莖直接進行大田移栽。

具體實施方式

為了加深對本發明的理解，下面結合實施案例對本發明進一步描述，該實施案例僅用于解釋本發明，并不構成對本發明保護范圍的限定。本領域技術人員在本發明基礎上做出的修改或改進，均應屬于本發明要求保護的范圍。