[發(fā)明專利]耐產(chǎn)物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶HJ5nag及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610023932.7
• 申請(qǐng)日: 2016-01-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105483102B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周峻沛;張蕊;黃遵錫;宋志鳳;唐湘華;李俊俊;吳倩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/42
• 分類號(hào): C12N9/42;C12N15/56;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12R1/19;C12R1/07;C12R1/85;C12R1/225
• 代理公司: 北京眾合誠(chéng)成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 裴娜

1.一種耐產(chǎn)物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶，其特征在于，所述耐產(chǎn)物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述耐產(chǎn)物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶總共含535個(gè)氨基酸，理論分子量為55.89kDa，其中N端有25個(gè)氨基酸為預(yù)測(cè)信號(hào)肽序列MNRRRGRAIAAATVLAASLAGCSPA，成熟的β-N-乙酰葡糖胺酶HJ5nag含510個(gè)氨基酸。

2.一種編碼權(quán)利要求1所述的β-N-乙酰葡糖胺酶HJ5nag的β-N-乙酰葡糖胺酶基因hJ5nag，其特征在于其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一種如權(quán)利要求1所述耐產(chǎn)物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的制備方法，其特征在于，所述耐產(chǎn)物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的制備方法包括以下步驟：

首先用包含β-N-乙酰葡糖胺酶基因hJ5nag的重組載體，重組載體為pEasy-E2-hJ5nag，將乙酰葡糖胺酶基因插入到表達(dá)載體中，使核苷酸序列與表達(dá)調(diào)控序列相連接，重組載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，得重組菌株；

然后培養(yǎng)重組菌株，誘導(dǎo)重組β-N-乙酰葡糖胺酶HJ5nag表達(dá)；

最后回收所表達(dá)的β-N-乙酰葡糖胺酶HJ5nag。

4.如權(quán)利要求3所述耐產(chǎn)物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的制備方法，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為大腸桿菌細(xì)胞，將重組大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌細(xì)胞BL21(DE3)，得到重組菌株BL21(DE3)/hJ5nag。

5.一種包含權(quán)利要求1所述耐產(chǎn)物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的重組載體。

6.如權(quán)利要求5所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體是將β-N-乙酰葡糖胺酶的基因插入到表達(dá)載體中，使核苷酸序列與表達(dá)調(diào)控序列相連接。

7.一種包含權(quán)利要求1所述耐產(chǎn)物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的重組菌株。

8.如權(quán)利要求7所述的重組菌株，其特征在于，所述重組菌株為大腸桿菌、酵母菌、芽孢桿菌或乳酸桿菌。