[發明專利]DNA探針組合和試劑盒

在審

• 申請號: 201610022696.7
• 申請日: 2016-01-13
• 公開（公告）號: CN105567683A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 張晶珠;毛瑜
• 申請（專利權）人: 深圳市坤健創新藥物研究院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京思創畢升專利事務所 11218
• 代理人: 韋慶文

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，更具體地，涉及一種DNA探針組合和包括 該DNA探針組合的試劑盒。

背景技術

微小RNA(miRNA)是一類小分子調控RNA，在腫瘤的發生與控制方 面發揮著重要的作用。已經發現在腫瘤患者的循環核酸中存在源自腫瘤的 miRNA分子，這一現象提示循環miRNA分子可能成為無創診斷癌癥的一 個有效的方法。研究表明miR-21，miR-155，miR-195，miR-222，miR-10b， miR-29a，miR-145在乳腺癌腫瘤患者血清中明顯過度表達，是評估療效的 潛在生物標志物。miR-16的表達穩定，可作為內參。

目前已有的血清中miRNA的檢測方法主要是實時熒光定量PCR (QuantitativeReal-timePCR)，所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR 反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最 后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

但是這個方法需要先對miRNA進行逆轉錄，并且RT-PCR的過程需要 完成高溫變性，低溫復性，適溫延伸的熱循環。操作繁瑣，并且需要使用 大型昂貴的儀器。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的上述缺陷，提供一種DNA探針組合和 包括該DNA探針組合的試劑盒。

本發明的發明人擬利用RCA技術對血清中miRNA進行檢測，DNA滾 環擴增(RCA)技術是一種等溫信號擴增方法，可在室溫下進行，使用兩 個引物就可實現指數滾環擴增，可用于極微量生物標記物的檢測。RCA能 直接擴增DNA或者RNA分子，所以將其用于血清中miRNA的檢測具有 快速、靈敏、特異的特點。此外，發明人發現如果只對某一特定的miRNA 表達量進行分析，很容易出現假陽性或假陰性的結果。

基于此，本發明提供一種DNA探針組合，該DNA探針組合包括：

(1)miR-155探針，所述miR-155探針為40-80nt的通過以下DNA序 列5’端和3’端連接而成的環狀DNA模板：

5’-GATTAGCATTAA(SEQIDNO：1)X₁ACCCCTATCAC(SEQIDNO： 2)-3’，X₁為任意序列的DNA片段；

(2)miR-195探針，所述miR-195探針為40-80nt的通過以下DNA序 列5’端和3’端連接而成的環狀DNA模板：

5’-CTGTGCTGCTA(SEQIDNO：3)X₂GCCAATATTT(SEQIDNO： 4)-3’，X₂為任意序列的DNA片段；

和(3)miR-16探針，所述miR-16探針為40-80nt的通過以下DNA序 列5’端和3’端連接而成的環狀DNA模板：

5’-TACGTGCTGCTA(SEQIDNO：5)X₃CGCCAATATT(SEQIDNO： 6)-3’，X₃為任意序列的DNA片段；

以及以下探針中的至少一種：

(4)miR-21探針，所述miR-21探針為40-80nt的通過以下DNA序列 5’端和3’端連接而成的環狀DNA模板：

5’-TGATAAGCTA(SEQIDNO：7)X₄TCAACATCAGTC(SEQIDNO： 8)-3’，X₄為任意序列的DNA片段；

(5)miR-29a探針，所述miR-29a探針為40-80nt的通過以下DNA序 列5’端和3’端連接而成的環狀DNA模板：

5’-AGATGGTGCTA(SEQIDNO：9)X₅TAACCGATTTC(SEQIDNO： 10)-3’，X₅為任意序列的DNA片段；

(6)miR-222探針，所述miR-222探針為40-80nt的通過以下DNA序 列5’端和3’端連接而成的環狀DNA模板：

5’-CAGATGTAGCT(SEQIDNO：11)X₆ACCCAGTAGC(SEQIDNO： 12)-3’，X₆為任意序列的DNA片段；