[發明專利]共表達抗EGFRvIII嵌合抗原受體和無功能EGFR受體的轉基因淋巴細胞及其用途

在審

• 申請號: 201610022365.3
• 申請日: 2016-01-13
• 公開（公告）號: CN106967684A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 嚴勇朝;朱益林;陳思毅
• 申請（專利權）人: 北京馬力喏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N7/01;C12N15/63;A61K35/17;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙)11201
• 代理人: 李志東

1.一種T淋巴細胞，其特征在于，所述T淋巴細胞表達無功能EGFR受體；

以及表達嵌合抗原受體，其中，

所述嵌合抗原受體包括：

胞外區，所述胞外區包括單鏈抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區，所述單鏈抗體特異性識別抗原EGFRvIII；

跨膜區，所述跨膜區與所述胞外區相連，并且嵌入到所述T淋巴細胞的細胞膜中；

胞內區，所述胞內區與所述跨膜區相連，并且所述胞內區包括CD28或4-1BB的胞內段以及CD3ζ鏈。

2.一種慢病毒，其特征在于，所述慢病毒攜帶下列核酸分子：

編碼嵌合抗原受體的核酸分子，所述嵌合抗原受體具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述編碼嵌合抗原受體的核酸分子具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；以及

編碼無功能EGFR受體的核酸分子，所述無功能EGFR受體具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，所述編碼無功能EGFR受體的核酸分子具有SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。

3.一種慢病毒，其特征在于，所述慢病毒攜帶含有SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列。

4.一種轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述淋巴細胞細胞表達無功能EGFR受體；

以及表達嵌合抗原受體。

5.根據權利要求4所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體包括：

胞外區，所述胞外區能夠與抗原特異性結合；

跨膜區；以及

胞內區，所述胞內區包括免疫共刺激分子胞內段。

6.根據權利要求5所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述抗原是腫瘤抗原。

7.根據權利要求6所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述胞外區包括抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區，所述抗體結合所述抗原。

8.根據權利要求7所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述抗體為單鏈抗體。

9.根據權利要求8所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述抗原為EGFRvIII。

10.根據權利要求5所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述免疫共刺激分子胞內段獨立地選自4-1BB、OX-40、CD40L、CD27、CD30、CD28以及他們的衍生物的至少一種。

11.根據權利要求10所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述免疫共刺激分子胞內 段是4-1BB或CD28的胞內段。

12.根據權利要求4所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述淋巴細胞是CD3+T淋巴細胞。

13.根據權利要求4所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述淋巴細胞是自然殺傷細胞。

14.根據權利要求4所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述淋巴細胞是自然殺傷T細胞。

15.一種構建體，其特征在于，所述構建體包括：

第一核酸分子，所述第一核酸分子編碼嵌合抗原受體；以及

第二核酸分子，所述第二核酸分子編碼無功能EGFR受體，

其中，所述嵌合抗原受體、所述無功能EGFR受體是如權利要求2、4～14任一項中所定義的。

16.根據權利要求15所述的構建體，其特征在于所述第一核酸分子以及所述第二核酸分子被設置為在權利要求4～14任一項所述的淋巴細胞中表達所述嵌合抗原受體和表達無功能EGFR受體，并且所述嵌合抗原受體與所述無功能EGFR受體呈非融合形式。

17.根據權利要求15所述的構建體，其特征在于，進一步包括：

第一啟動子，所述第一啟動子與所述第一核酸分子可操作地連接；以及

第二啟動子，所述第二啟動子與所述第二核酸分子可操作地連接。

18.根據權利要求17所述的構建體，其特征在于，所述第一啟動子、所述第二啟動子分別獨立地選CMV,EF-1,LTR,或RSV啟動子。