[發(fā)明專利]一種利用微通道低溫凍存大鼠胰島細(xì)胞的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610022353.0
• 申請(qǐng)日: 2016-01-13
• 公開（公告）號(hào): CN105454221B
• 公開（公告）日: 2018-01-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳萬煜;張麗;李鵬程;陳熹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢理工大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司42102
• 代理人: 王守仁

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞低溫凍存技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種利用微通道低溫凍存大鼠胰島細(xì)胞的方法，該方法是將含有氨基酸類凝膠因子的大鼠胰島細(xì)胞懸浮液導(dǎo)入微通道中，使其在微通道受限空間中自組裝形成具有纖維狀三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的超分子凝膠，進(jìn)而在低溫凍存過程中保護(hù)大鼠胰島細(xì)胞，減小細(xì)胞冷存損傷。

背景技術(shù)

糖尿病是常見的內(nèi)分泌疾病，據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟公布數(shù)據(jù)顯示，全球糖尿病患者目前已達(dá)3.82億人，而我國糖尿病患病人數(shù)居全球之首，占全球患者總數(shù)的三分之一。細(xì)胞移植是治療糖尿病的有效手段。但是由于每一次分離得到的活體細(xì)胞數(shù)量很難滿足一次臨床移植的需要，因此胰島細(xì)胞的保存是胰島移植需要研究的重要課題。

低溫凍存是目前保存細(xì)胞或組織最普遍的方法，即往含有活細(xì)胞或組織的培養(yǎng)液中加入一定量的凍存保護(hù)劑，然后以一定的速率降至某一溫度，并將活細(xì)胞或組織保存在該溫度下一定時(shí)間。在凍存過程中，細(xì)胞內(nèi)的新陳代謝被抑制，細(xì)胞或組織的活性“暫?！?，所以細(xì)胞或組織得以長期保存，待需要使用時(shí)再將其復(fù)溫，細(xì)胞或組織的活性和功能可恢復(fù)正常。關(guān)于胰島的冷凍保存國內(nèi)外已有相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道(如：文獻(xiàn)[1]Carlos A.Agudelo,Hiroo Iwata.The development of alternative vitrification solutions for microencapsulated islets[J].Biomaterials,2008,29:1167-1176；文獻(xiàn)[2]Stephan Schneider,Harald H.Klein.Long-term graft function of cryostored alginate encapsulated rat islets[J].Eur J Med Res,2011,16:396-400.；文獻(xiàn)[3]Liu F.,Tian W.C.,Yang Y.A.,Zhang Q.,Zhu M.M.,Yang L.,Yang L.,Li J.,Liu J.,Wu P..Optimal method for short-term or long-term islet preservation:comparison of islet culture,cold preservation and cryopreservation[J].Journal of Artificial Organs,2014,17(4):337-343.)，目前的方法主要有玻璃化冷凍保存和慢速冷凍保存兩種。在低溫凍存過程中，細(xì)胞內(nèi)外形成的冰晶會(huì)對(duì)大鼠胰島細(xì)胞造成損傷，而且在凍存保護(hù)劑添加過程細(xì)胞內(nèi)外滲透壓的變化也會(huì)對(duì)細(xì)胞造成傷害。雖然這兩種方法能在一定程度上降低細(xì)胞受到的冰晶損傷，但是在凍存過程中細(xì)胞直接或間接地暴露在凍存保護(hù)劑中，所以細(xì)胞毒性較大，細(xì)胞的存活率和功能受到了一定的影響。