[發明專利]單域抗原結合性分子的純化方法

在審

• 申請號: 201610020815.5
• 申請日: 2009-10-29
• 公開（公告）號: CN105646643A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 保羅.R.布朗;斯科特.A.托布勒;安德魯.M.伍德;奧斯汀.W.伯施
• 申請（專利權）人: 阿布林克斯公司
• 主分類號: C07K1/22
• 分類號: C07K1/22;C07K1/18;C07K16/06;C07K16/18;C07K16/24
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 曹立莉;何偉

1.一種從含有包含一個或多個納米抗體分子的單域抗原結合性(SDAB)分子和一種或 多種污染物的混合物分離或純化所述SDAB分子的方法，包括：

將所述混合物與基于陽離子交換的載體在允許所述SDAB分子結合或吸附至所述載體 的條件下接觸；

去除一種或多種污染物；和

從所述載體選擇性洗脫所述SDAB分子，

其中所述SDAB分子不具有互補性抗體可變域或免疫球蛋白Fc區。

2.權利要求1的方法，其中所述去除一種或多種污染物的步驟包括在所述SDAB分子保 持與所述載體結合的條件下清洗所述結合的載體。

3.權利要求1-2中任一項的方法，其中所述SDAB分子是在哺乳動物宿主細胞優選在CHO 細胞中產生的重組蛋白。

4.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述混合物中的污染物包含一種或多種高分子 量蛋白聚集體、宿主細胞蛋白或DNA。

5.權利要求1-4中任一項的方法，其中將所述SDAB分子純化至至少85％、90％、95％、 96％、97％、98％、99％或更高的純度。

6.權利要求1-5中任一項的方法，其中所述方法包括：

將所述含有SDAB分子和一種或多種污染物的混合物與陽離子交換(CEX)樹脂接觸，其 中所述CEX樹脂顯示至少約10g/L、20g/L、30g/L、40g/L、50g/L或60g/L的容量；

允許所述SDAB分子流過所述載體，用至少一種陽離子交換清洗緩沖液清洗所述載體； 和

用洗脫緩沖液洗脫所述SDAB分子。

7.權利要求1-6中任一項的方法，其中所述用于裝載柱的條件介質(CM)的電導率為約 15-5mS/cm，例如12-9mS/cm并且將裝載條件的pH調節至小于約6、5.5、5、4.5、4.4、4.3、4.2、 4.1、4、3.9、3.8或3.7，例如等于或小于約4.5。

8.權利要求1-7中任一項的方法，其中所述洗脫緩沖液等于或小于約50mM氯化鈉，并且 具有約5.5-7.2的pH。

9.權利要求1-8中任一項的方法，進一步包括將所述混合物與羥基磷灰石樹脂接觸并 從所述羥基磷灰石樹脂選擇性洗脫所述SDAB分子。

10.權利要求9的方法，進一步包括用平衡緩沖液預處理所述混合物并允許所述經預處 理的混合物流過羥基磷灰石樹脂。

11.權利要求10的方法，其中將所述混合物與羥基磷灰石樹脂接觸的步驟和所述洗脫 步驟是在包含約1-20mM磷酸鈉和約0.2-2.5M氯化鈉、pH為約6.4-7.6的緩沖溶液中進行的。

12.權利要求10或11的方法，其中所述平衡緩沖液包含約1-20mM的磷酸鈉，約0.01- 2.0M氯化鈉、約0-200mM精氨酸、約0-200mMHEPES，pH為約6.2-8.0。

13.權利要求1-12中任一項的方法，其中所述純化的SDAB分子含有少于10％高分子量 聚集體。