[發明專利]伏馬毒素B1核酸適配體鏈置換探針的篩選及應用

有效

• 申請號: 201610019729.2
• 申請日: 2016-01-11
• 公開（公告）號: CN105543231B
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發明（設計）人: 劉繼紅;王紅旗;李淑芳;尹海燕;馬瑩;李靜;祁玉峰;張軍鋒
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/68
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 鄭園;張真真

1.一種伏馬毒素B₁核酸適配體鏈置換探針，其特征在于：所述鏈置換探針為一段單鏈寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO：1所示，所述探針5’端修飾有FAM熒光基團；

所述探針與伏馬毒素B₁核酸適配體互補。

2.權利要求1所述伏馬毒素B₁核酸適配體鏈置換探針作為玉米和小麥中伏馬毒素B₁的熒光偏振檢測分析應用；

將權利要求1所述的鏈置換探針應用于FB₁的熒光偏振檢測分析，具體步驟如下：

（1）玉米樣品中FB₁的提取：稱取20 g已粉碎的玉米樣品，加入100 mL 磷酸鹽緩沖液，振蕩提取1 h，過濾，濾液樣品備用；

（2）雜交復合物的制備：FB₁核酸適配體儲備液用之前經過95℃ 5 min，冰水浴5 min處理一下；5 μM FB₁核酸適配體2 μL，5 μM權利要求1所述的FB₁鏈置換探針2 μL，10×反應緩沖溶液20 μL，加純凈水調整反應體系的總反應體積到200 μL；將反應混合物于37℃溫度下雜交1 h，室溫下放置備用；

（3）檢測步驟：

①反應前，體系熒光偏振值P₀的測量：取10 μL上述雜交復合物，100 μL 10×反應緩沖溶液到一次性熒光偏振玻璃試管中，最后用純凈水稀釋到1 mL，混合均勻，測量反應體系的初始熒光偏振值P₀；

②反應后，體系熒光偏振值P的測量：10 μL上述雜交復合物，100 μL 10×反應緩沖溶液，50 μL 0-200 nM的FB₁靶標溶液或者100 μL樣品濾液，用1×反應緩沖溶液稀釋到1 mL，混合均勻，37℃下反應20min，測量反應體系的最終熒光偏振值P。