[發明專利]腸道病毒熒光PCR檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201610019626.6
• 申請日: 2016-01-13
• 公開（公告）號: CN105624331A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 江蘇和創生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種采用熒光PCR技術特異性檢測樣品中腸道病毒核酸存在的試劑盒，屬于腸道病毒的體外診斷領域。

背景技術

腸道病毒屬于單鏈正股RNA病毒，病毒體呈球型，衣殼為20面體對稱結構，無包膜，具有感染性。在宿主細胞漿內增殖，迅速引起細胞病變。主要經糞一口途徑傳播，臨床表現多樣化，引起人類多種疾病，如脊髓灰質炎、手足口病、麻痹、無菌性腦炎、心肌損傷、腹瀉和皮疹等。

人腸道病毒至少由72個血清型組成，其種類有：

①人脊髓灰質炎病毒1～3型；

②人柯薩奇病毒A組1～22型和24型（A-23型為埃可病毒9型），B組1～6型；

③埃可病毒1～9，11～27，29～34共32個血清型；

④新型腸道病毒68～72型，其中1971年分出的70型，能引起急性出血性結膜炎備受重視，72型為甲型肝炎病毒。輪狀病毒、腸道腺病毒。

在實驗室檢測中，PCR法由于其快速簡便的特點逐漸呈現出要替代以細胞培養和血清學檢測為主的傳統檢測方法的趨勢。而對于PCR方法來說，引物的特異性是其檢測的特異性和敏感性的基礎。本發明針對腸道病毒特異的靶序列設計引物和Taqman探針，利用real-timeRT-PCR的方法，用來鑒別檢測樣品中腸道病毒核酸，可以快速獲得特異性檢測結果。

發明內容

本發明主要解決的技術問題是快速準確地檢測樣品中是否存在腸道病毒，提供一種特異性檢測腸道病毒的熒光PCR試劑盒。

本發明所要解決的技術問題是通過以下技術方案來實現的：

一種特異性檢測樣品中腸道病毒的試劑盒，組分包括PCR反應液、酶混合液、陰性質控品和陽性質控品。其中PCR反應液主要含有相關的引物和探針、反應緩沖液、Mg²⁺和dNTP等，酶混合液主要含有逆轉錄酶和熱啟動Taq酶，陰性質控品為無RNase和DNase水，陽性質控品為含有腸道病毒檢測靶序列的RNA。

PCR反應液中用于核酸擴增的引物為P1和P2，P1和P2為針對腸道病毒基因組群特異性保守序列設計并經預實驗篩選出的特異性引物；PCR反應液中用于熒光信號監測的寡核苷酸探針為Probe1、2、3，為針對腸道病毒基因組群特異性保守序列設計并經預實驗篩選出的特異性探針，其中熒光報告基團X₁為FAM，熒光淬滅基團Y₁為Eclipse（見表1）。

表1檢測腸道病毒的引物和探針序列

名稱序列P15`-CCCTGAATGCGGCTAATC-3`P25`-ATTGTCACCATAAGCAGCCA-3`Probe15`-X<sub>1</sub>-CCGACTACTTTGGGWGTCCGTGT-Y<sub>1</sub>-3`Probe25`-X<sub>1</sub>-AACTGCGGAGCACACGCCCAC-Y<sub>1</sub>-3`Probe35`-X<sub>1</sub>-TAACTGCGGAGCRCGCACCCTC-Y<sub>1</sub>-3`

本發明的另一個目的是提供本熒光PCR檢測試劑盒在檢測腸道病毒的應用方法，包括：