[發明專利]一株有效降解亞硝酸鹽的解淀粉芽孢桿菌

在審

• 申請號: 201610019210.4
• 申請日: 2016-01-12
• 公開（公告）號: CN105543139A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發明（設計）人: 廖祥儒;王爽;徐君
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;A23L5/20;A23L29/00;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及利用微生物進行環境治理方面，屬于生物工程技術領域。具體涉及一株可降解亞硝酸鹽的解淀粉芽孢桿菌。

背景技術

亞硝酸鹽作為氧化劑應用于工業和建筑業，也可作為發色劑及防腐劑限量應用于肉制品，然而亞硝酸鹽可引發嬰兒高鐵血紅蛋白癥，嬰兒先天畸形，甲狀腺腫并與蛋白質分解產物二級胺反應生成強致癌物亞硝胺。水體及食品中亞硝酸鹽有限量標準。

在水產養殖業方面，隨著養殖水平的不斷提高，養殖密度的不斷加大，對池塘的投入也在不斷地增加，水體的負載大都達到或超過飽和程度，進而使水體的理化條件不斷惡化。水體中的氨氮、亞硝態氮(亞硝酸鹽)等有毒有害物質大量產生，致使養殖魚類容易中毒死亡，往往給養殖戶帶來比較慘重的損失。

微生物降解法被認為是減少或消除有害化合物污染的有效方法，篩選有效降解亞硝酸鹽的食品安全性微生物是實現減少或消除水體及發酵食品中亞硝酸鹽含量的有效方法。

發明內容：

本發明的目的是提供一株可有效降解亞硝酸鹽的菌株—解淀粉芽孢桿菌。(BacillusamyloliquefaciensH47)。

本發明所提供的降解菌株為解淀粉芽孢桿菌(BacillusamyloliquefaciensH47)保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地點武漢市武昌珞珈山武漢大學，保藏編號為CCTCCM2013283，保藏日期2013年6月24日。

所述解淀粉芽孢桿菌降解亞硝酸鹽的步驟為：1)菌株H47種子液的制備。取保藏于-80℃甘油管的種子液50μL于裝有50mLLB培養基250mL三角瓶中,于30℃200r/min搖床培養。

2)菌株H47降解亞硝酸鹽的測定：準確移取0.5mL均勻活化種子液于裝有50mLLB培養基(含150mg/LNaNO2)的250mL三角瓶中。30℃培養，定時取樣。得發酵液上清，按照GB5009.33—2010所述方法2——分光光度法(略微改動)對發酵液中亞硝酸鹽含量進行測定。

3)所述發酵液上清獲得方法為發酵液在8000r/min離心機下離心，獲得上清。

4)所述分光光度法測定發酵液中亞硝酸鹽含量的方法為：取3mL上清液加去離子水至28.5mL，加亞鐵腈化鉀(106g/L)0.75mL，乙酸鋅溶液(106g/L)0.75mL，混勻反應30min。8000r/min離心10min。取20mL上清于25mL比色管中加2mL對氨基苯磺酸鈉溶液(4g/L)顛倒均勻反應3min再加1mL鹽酸萘乙二胺溶液(2g/L)，用去離子水定容至25mL，顛倒均勻，反應15min，于波長538nm處測吸光度。

本發明所用的培養基為LB培養基：胰蛋白胨10g，酵母浸提物5g，NaCl10g，加水定容至1L，調pH為7.1±0.1，115℃滅菌20min。

與其他技術相比，該發明的積極效果在于：解淀粉芽孢桿菌是公認的生物安全菌，對人畜無毒無害，不污染環境。其代謝產物較為豐富，具有廣譜抗菌活性和較強的抗逆能力，生長快，穩定性較好。該菌可降解亞硝酸鹽，具有速度快，費用低，操作步驟簡單等優點，為減少水體中亞硝酸鹽含量提供了良好的菌源及思路。

附圖說明：

圖1為降解菌株H47作用于150mg/L的亞硝酸鈉的降解曲線。

圖2為降解菌株H47對不同濃度亞硝酸鈉的降解能力。

具體實施方式：

下面結合實施例對本發明進行進一步描述。以下實施例僅為本發明的幾個具體實施例，但本發明的設計構思并不局限于此，凡利用此構思對本發明進行非實質性的改動，均應屬于侵犯本發明保護范圍的行為。

實施例1：不同培養時間對菌株H47降解亞硝酸鹽的情況。

菌種H47種子液的制備：取保藏于-80℃甘油管的種子液50μL于裝有50mLLB培養基250mL三角瓶中,于30℃，200r/min搖床培養。

準確移取0.5mL均勻活化種子液于裝有50mLLB培養基(含150mg/LNaNO2)的250mL三角瓶中。30℃培養，定時取樣。得發酵液上清，按照GB5009.33—2010所述方法2——分光光度法(略微改動)對發酵液中亞硝酸鹽含量進行測定。以不接H47菌株的含150mg/L的亞硝酸鈉的LB培養基作空白對照。菌株H47作用于含150mg/L的亞硝酸鈉LB培養基，對亞硝酸鈉的降解曲線如圖1所示。菌株H47對亞硝酸鈉有明顯的降解作用，12h對亞硝酸鈉的降解率可達99.77％。