[發(fā)明專利]一種從發(fā)酵液中分離提取四氫嘧啶的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610017537.8
• 申請日: 2016-01-12
• 公開（公告）號: CN105669560B
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳寧;范曉光;寧義科;徐慶陽;謝希賢;張成林;李燕軍
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號: C07D239/06
• 分類號: C07D239/06
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11617
• 代理人: 郭曉迪

1.一種從發(fā)酵液中分離提取四氫嘧啶的方法，包括如下步驟：

a、取富含四氫嘧啶的發(fā)酵液，用鹽酸調(diào)節(jié)pH為3.0-6.0后泵入微濾膜分離系統(tǒng)，收集過濾液，當(dāng)過濾液中四氫嘧啶濃度低于1.0g/L時停止收集，得到除去菌體的四氫嘧啶微濾液；

b、將a步獲得的微濾液泵入超濾膜分離系統(tǒng)，對微濾液進(jìn)行除蛋白和脫色處理，收集過濾液，當(dāng)過濾液中四氫嘧啶濃度低于1.0g/L時停止收集，得到除去蛋白和色素的四氫嘧啶超濾液；

c、將b步獲得的超濾液泵入離子交換柱，經(jīng)陽離子交換樹脂吸附，進(jìn)樣流速為1BV/h，吸附飽和后采用0.02-0.2mol/L的氨水洗脫，洗脫流速為0.05-2BV/h，收集pH=7-12的四氫嘧啶高流分洗脫液；

d、將c步獲得的高流分洗脫液加入0.05%-5% m/v 的活性炭脫色，溫度20-40℃，攪拌脫色10-30 min，過濾獲得四氫嘧啶脫色液；

e、將d步獲得的脫色液減壓濃縮至原體積的5%-15%，加入乙醇沉淀獲得四氫嘧啶粗品；

f、將e步獲得的四氫嘧啶粗品重新溶解于去離子水至飽和，4℃下靜置結(jié)晶后過濾獲得晶體，60℃干燥后得到四氫嘧啶成品。

2.如權(quán)利要求1所述的一種從發(fā)酵液中分離提取四氫嘧啶的方法，其特征在于，步驟a中所述的微濾膜分離系統(tǒng)采用中空纖維微濾膜，微濾膜孔徑為0.02-0.2μm，操作溫度為25-45℃，操作壓力為0.05-0.2MPa。

3.如權(quán)利要求1所述的一種從發(fā)酵液中分離提取四氫嘧啶的方法，其特征在于，步驟b中所述的超濾膜分離系統(tǒng)采用中空纖維超濾膜，超濾膜孔徑為0.001-0.01μm，操作溫度為25-45℃，操作壓力為0.1-0.5MPa。

4.如權(quán)利要求1所述的一種從發(fā)酵液中分離提取四氫嘧啶的方法，其特征在于，步驟c中所述的陽離子交換樹脂為凝膠型樹脂或大孔型樹脂。

5.如權(quán)利要求1或4所述的一種從發(fā)酵液中分離提取四氫嘧啶的方法，其特征在于，步驟c中所述的陽離子交換樹脂為001*7，D072，D061樹脂中的一種。

6.如權(quán)利要求1所述的一種從發(fā)酵液中分離提取四氫嘧啶的方法，其特征在于，還包括對步驟f得到的四氫嘧啶成品純度的檢測，使用 UltiMate 3000 Thermo Scientific高效液相色譜儀測定四氫嘧啶，色譜柱為 TSK-GEL C18 色譜柱，柱溫 30℃，流動相為2%乙腈，流速 1mL/min，紫外檢測波長 210nm。

7.如權(quán)利要求1所述的一種從發(fā)酵液中分離提取四氫嘧啶的方法，包括如下步驟：

a、取四氫嘧啶發(fā)酵液5L，四氫嘧啶含量25.0g/L，用4mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH為4.0，進(jìn)入微濾膜分離系統(tǒng)，得到去除菌體的四氫嘧啶微濾液；所述微濾膜分離系統(tǒng)采用中空纖維微濾膜，微濾膜孔徑為0.02μm，操作溫度為30℃，操作壓力為0.2MPa，收集過濾液，當(dāng)過濾液中四氫嘧啶濃度低于1.0g/L時停止收集；菌體去除率為99.2%；

b、將經(jīng)a步得到的微濾液泵入超濾膜分離系統(tǒng)，得到去除蛋白和色素的四氫嘧啶超濾液；所述超濾膜分離系統(tǒng)采用中空纖維超濾膜，超濾膜孔徑為0.003μm，操作溫度為40℃，操作壓力為0.3MPa，收集過濾液，當(dāng)過濾液中四氫嘧啶濃度低于1.0g/L時停止收集，蛋白去除率為80.8%，透光率為72.3%；

c、將b步獲得的超濾液以1BV/h的流速泵入D061陽離子交換樹脂吸附，吸附飽和后用0.15mol/L的氨水洗脫，洗脫流速為0.05BV/h，收集pH為7-12的四氫嘧啶高流分洗脫液；

d、將c步獲得高流分洗脫液加入3% m/v的活性炭脫色，溫度40℃，攪拌脫色15min，過濾獲得四氫嘧啶脫色液，透光率為99.8%；

e、將d步獲得的脫色液減壓濃縮至原體積液的10%，加入乙醇沉淀獲得四氫嘧啶粗品；

f、將e步獲得的四氫嘧啶粗品重新溶解于去離子水至飽和，4℃下靜置結(jié)晶后過濾獲得晶體，60℃干燥后得到四氫嘧啶成品101.3g；

g、使用 UltiMate 3000 Thermo Scientific 高效液相色譜儀測定四氫嘧啶，取f步獲得的成品加水溶解后使用微量進(jìn)樣針，進(jìn)樣量20μL，色譜柱為 TSK-GEL C18 色譜柱，柱溫30℃，流動相為2%乙腈，流速 1mL/min，紫外檢測波長 210nm，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算四氫嘧啶純度為98.2%。