[發明專利]一種用于檢測細胞角蛋白19的膠體金層析試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 201610017375.8
• 申請日: 2016-01-12
• 公開（公告）號: CN105572383A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 陳雯雯;張會生;王紀東;曹豐晶
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/531
• 代理公司: 廣東前海律師事務所 44323
• 代理人: 張紹波

技術領域

本發明涉及免疫檢測分析技術領域，特別是涉及一種用于檢測淋巴組織、腫瘤組 織裂解液或體液中、腫瘤細胞中細胞角蛋白19（CK19）的膠體金層析試紙條及其制備方法。

背景技術

隨著生活方式的快速改變，現代人罹患癌癥的概率不斷增高，其高發病率和死亡 率已經成為城市和農村人口死亡的主要原因。手術是癌癥治療最常用的手段之一。隨著人 們對癌癥治療認識的不斷深入，手術治療的模式也逐漸從“最大可耐受治療”向“最小可有 效治療”轉變，更加關注患者術后的生活質量。

前哨淋巴結是指通過淋巴管進行轉移的癌細胞首先到達的一個或數個淋巴結。淋 巴結分級是決定早期癌癥的診斷、治療和預后的重要因素之一。根據癌灶附近淋巴結的狀 態，醫生可以為患者制定相應的治療策略。如果前哨淋巴結中能夠檢測到腫瘤細胞，則證明 癌癥已經不是局部病變，已經發展成全身性疾病，必須通過淋巴清掃來局部抑制腫瘤的發 展，同時結合放、化療進行后續治療，而患者的預后通常不好；如果前哨淋巴結中沒有發現 癌細胞的轉移，則證明患者的腫瘤分期較早，可以不用進行淋巴清掃。淋巴清掃直觀的反映 就是淋巴循環中斷，造成患者局部水腫；淋巴清掃時傷及神經，造成患者局部麻木，持續性 疼痛；淋巴清掃時傷及肌肉組織，造成患者運動障礙。隨著影像學技術和人們對癌癥防范意 識的提高，癌癥的早期確診率在不斷提高，而通常在早期癌癥中，很多患者的癌旁淋巴結通 常沒有發生癌癥轉移，對這部分病人進行淋巴清掃不但不能提高病人的生存率，而且會因 為過度治療極大的影響病人的生存質量，給病人及家屬帶來很多麻煩。

為了準確評估癌旁淋巴組織的狀態，臨床上逐漸探索出了前哨淋巴活檢術的方 法。現有的前哨淋巴中癌細胞的轉移狀態可以通過組織病理學檢查來判斷，目前最常用的 方法是冰凍切片和石蠟切片兩種。冰凍切片的優勢在于簡單快速，通過HE染色，大約30分鐘 左右可以得到結果，如果結果為陽性就需要進行淋巴清掃，結果為陰性則僅需切除癌組織。 該方法最大的不足是假陰性率較高，不同醫院結果不同，通常在5%～10%之間，假陰性結果 會給病人帶來二次手術的痛苦。石蠟切片是判斷癌細胞是否發生轉移的金標準，該方法通 常需要3～5天才能得到結果，不能在術中快速提供前哨淋巴是否發生癌轉移的信息。如果 采用該方法，則病人要進行兩次手術，對病人造成很大痛苦同時耽誤后續治療。同時，切片 方法還存在有共同的不足之處：1.前哨淋巴的數量一般會多達10枚以上，為了節省人力，一 般只隨機挑選幾個進行檢測，容易造成漏檢。2.組織的利用程度低，通常只會截取幾個截面 進行染色分析，其余的遺棄，如果轉移灶的體積較小則容易造成漏檢。3.結果非客觀標準。 不同病理醫生對同一張片子的判讀結果可能不同。

細胞角蛋白19（CK19）是上皮細胞的特異性標志物，在肌肉組織（平滑肌、心肌、骨 骼肌等）、結締組織（血液、骨、脂肪）和神經組織中均不表達，90%以上的惡性腫瘤是上皮細 胞發展而來，因此通過檢測CK19蛋白可以確定前哨淋巴結中是否存在有轉移的癌細胞。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種方便、快捷、準確度高的檢測CK19的膠體 金層析試紙條及其制備方法。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：

一種用于細胞角蛋白19（CK19）檢測的膠體金層析試紙條，包括底板、樣品墊、結合墊、 硝酸纖維膜、吸水墊，所述底板一端順次搭接粘貼樣品墊、結合墊、硝酸纖維膜、吸水墊，其 特征在于：所述結合墊為涂覆有CK19單克隆抗體-膠體金結合物的玻璃纖維膜,所述硝酸纖 維膜上包被檢測T線和質控C線，T線為CK19的多克隆抗體，C線為與CK19單克隆抗體對應的 二抗。

進一步，還包括一卡殼，所述膠體金層析試紙條置于所述卡殼內，卡殼上開有顯色 區和加樣孔，加樣區對準樣品墊所在區域，顯色區對準T線和C線所在區域。

此外，本發明還提供了一種膠體金層板試紙條的制備方法，包括如下步驟：

（1）取200μgCK19蛋白的單克隆抗體置于透析袋中采用5mMTris-HCl透析24h,在此 過程中，每隔2h換一次水，透析完成后，將單克隆抗體取出置于離心管中，加入三蒸水至 2mL,離心后棄去沉淀雜質；