[發(fā)明專(zhuān)利]一種雞基因AGK甲基化檢測(cè)方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610016846.3
• 申請(qǐng)日: 2016-01-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105483264B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李顯耀;王莎莎;吳桂賢;王巧巧
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/689
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/689;C12Q1/10;C12R1/42
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種雞基因AGK甲基化檢測(cè)方法及其應(yīng)用，該方法提供了雞基因AGK甲基化檢測(cè)的特異性引物及配合該引物使用的巢式PCR條件，利用上述引物和方法，可以準(zhǔn)確檢測(cè)雞感染腸炎沙門(mén)氏菌后AGK基因中的甲基化情況，并可以以此作為分子標(biāo)記為雞抗腸炎沙門(mén)氏菌感染提供理論依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種雞基因AGK甲基化檢測(cè)方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

雞腸炎沙門(mén)氏菌病是家禽生產(chǎn)中的常見(jiàn)疾病，腸炎沙門(mén)氏菌能夠透過(guò)蛋殼進(jìn)入雞蛋產(chǎn)品中，且能在生殖道中寄存繁殖。之前有報(bào)道，美洲等發(fā)達(dá)國(guó)家中發(fā)生的食物中毒事件，大多數(shù)是由禽類(lèi)的沙門(mén)氏菌而引起的，而其中，起主要作用的病原就是腸炎沙門(mén)氏菌。腸炎沙門(mén)氏菌對(duì)家禽生產(chǎn)造成重大影響，引起畜禽發(fā)病，而且是食源性致病菌，能通過(guò)家禽副產(chǎn)品給人類(lèi)的健康帶來(lái)很大的威脅，是報(bào)道最頻繁的致病微生物之一。

AGK基因在疾病中尤其是癌癥中具有重要的調(diào)控作用，已有研究證明AGK基因在各種腫瘤中例如前列腺癌、食道鱗狀癌癥、卵巢癌、胃癌、乳癌等中表達(dá)上調(diào)。此外，AGK基因能作為肝細(xì)胞癌一個(gè)新的藥物作用靶點(diǎn)。到目前為止，尚未有關(guān)于AGK基因在雞腸炎沙門(mén)氏菌感染中發(fā)揮的甲基化調(diào)控作用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的發(fā)明人針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的情況，結(jié)合長(zhǎng)期研究和探索，提供了一種雞基因AGK甲基化檢測(cè)方法及其應(yīng)用，該方法提供了雞基因AGK甲基化檢測(cè)的特異性引物及配合該引物使用的巢式PCR條件，利用上述引物和方法，可以準(zhǔn)確檢測(cè)雞感染腸炎沙門(mén)氏菌后AGK基因中的甲基化情況，并可以以此作為分子標(biāo)記為雞抗腸炎沙門(mén)氏菌感染提供理論依據(jù)。

發(fā)明人提供的具體技術(shù)方案如下：

一種雞基因AGK甲基化檢測(cè)方法，所采用的方法為巢式PCR，所采用的雞AGK基因特異性的甲基化引物，其序列如下表所示：

上述引物前一對(duì)為第一對(duì)引物，后一對(duì)為第二對(duì)引物，利用上述2對(duì)特異性引物對(duì)經(jīng)亞硫酸鹽對(duì)修飾處理后的雞的全基因組基因DNA進(jìn)行巢式PCR，2次反應(yīng)條件一致，其PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系如下，每20μL體系為：