[發(fā)明專利]一種雞腸炎沙門氏菌感染抗性性狀分子標記gga-miR-1662及其檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610015399.X | 申請日： | 2016-01-11 |
| 公開（公告）號： | CN105543227A | 公開（公告）日： | 2016-05-04 |
| 發(fā)明（設計）人： | 李顯耀;吳桂賢;劉麗英;劉肖意 | 申請（專利權）人： | 山東農業(yè)大學 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 271018 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 腸炎 沙門氏菌 感染 抗性 性狀 分子 標記 gga mir 1662 及其 檢測 方法 | ||
1.一種雞腸炎沙門氏菌感染抗性分子標記，該抗性分子標記為雞miRNAgga-miR-1662，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。
2.權利要求1所述雞腸炎沙門氏菌感染抗性分子標記檢測方法，具體步驟如下：
gga-miR-1662的表達量檢測
miRNA反轉錄
用OneStepmiRNAcDNASynthesisKit(PerfectRealTime)試劑盒，嚴格按說明書進行；反轉錄體系為20μL，如表1所示；反應程序為：37℃，60min；85℃，5s；反應完成后獲得的cDNA置于-20℃保存?zhèn)溆茫?
表1miRNA反轉錄體系
gga-miR-1662熒光定量PCR
根據gga-miR-1662成熟序列設計引物，如表2所示；利用所設引物，采用SYBRGreenI染料法，按照TaKaRa公司的SYBRPrimeScriptTMmiRNART-PCRKit說明書，在StratageneMX3000P熒光定量PCR儀上進行擴增，反應體系如表3所示；
表2miRNA定量檢測引物
表3熒光定量PCR體系
熒光定量PCR反應程序采用兩步法：95℃預變性30s，1個循環(huán)；95℃5s，60℃30s，40個循環(huán)；最后添加溶解曲線(95℃1min，62℃30s，95℃30s)，1個循環(huán)，每個cDNA樣品重復三次；以U6作為內參基因，用2-ΔΔCt方法來計算miRNA的相對表達量，用SAS8.1軟件中單因素方差分析對gga-miR-1662表達量差異進行分析。
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