[發明專利]一種中國被毛孢菌株的獲取方法

有效

• 申請號: 201610013317.8
• 申請日: 2016-01-07
• 公開（公告）號: CN105670937B
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發明（設計）人: 李文佳;呂延華;李全平;張宗耀
• 申請（專利權）人: 廣東東陽光藥業有限公司;宜昌山城水都冬蟲夏草有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種中國被毛孢菌株的獲取方法，其特征在于，從感染中國被毛孢菌的蝙蝠蛾幼蟲的消化液中獲取中國被毛孢菌株；所述消化液主要為腸液；

所述獲取方法包括以下步驟：

1)收集蝙蝠蛾幼蟲消化液：取經過中國被毛孢菌侵染的蝙蝠蛾幼蟲，做8h-24h饑餓處理后，卡住幼蟲使其無法前后移動，出于本能，蟲子會自然吐出消化液；

2)菌落培養：收集的消化液進行稀釋，將稀釋液涂布于帶有培養基的培養皿表面，待菌落長至直徑為2-4mm時進行單菌落轉管培養；待菌落直徑為1.5-2.5cm時，即可作為中國被毛孢發酵的初始菌株。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)所述的蝙蝠蛾幼蟲為3-5齡。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)所述的幼蟲饑餓處理所處的環境為：溫度8-12℃，相對濕度65-85％，無光照。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)所述的卡住幼蟲為在幼蟲胸腹部上方覆蓋一塊濾紙，露出幼蟲的頭部及胸部1-2節部位，拇指及食指固定在蟲體兩邊的濾紙上，使得蟲子無法前后移動。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的幼蟲胸腹部上方覆蓋一塊濾紙，濾紙的長：寬為：10cm-15cm：7-10cm。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述消化液的稀釋，稀釋程度為每10μL稀釋液中菌體個數為8-12個。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述培養皿培養基的配方的質量比為：葡萄糖28-32、蛋白胨8-12、酵母提取物8-12、無水硫酸鎂0.8-1.2、磷酸二氫鉀0.2-0.3、瓊脂16-20、抗生素2-3、水800-1200，pH5.5-7，其中抗生素選自慶大霉素、阿奇霉素、青霉素中的一種或多種；

步驟2)所述的轉管培養培養基的配方質量比為：葡萄糖28-32、蛋白胨8-12、酵母提取物8-12、無水硫酸鎂0.8-1.2、磷酸二氫鉀0.2-0.3、瓊脂16-20、水800-1200，pH5.5-7。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述的菌落培養的環境為避光、溫度15-18℃、相對濕度45-65％。