[發明專利]解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種及其固態菌劑的制備與應用

在審

• 申請號: 201610012108.1
• 申請日: 2016-01-08
• 公開（公告）號: CN105624061A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 張俊會;薛泉宏;高卉;來航線;王平
• 申請（專利權）人: 陜西博秦生物工程有限公司;西北農林科技大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C09K8/582;E21B43/22;C12R1/07
• 代理公司: 西安睿通知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 61218
• 代理人: 惠文軒

技術領域

本發明屬于利用微生物及其代謝產物提高原油采收率的三次采油技術領域，具體涉及解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種及其固態細菌制劑的制備與應用。

背景技術

石油是工業經濟的血液，石油儲量及產量關系到國家經濟、社會可持續發展與國防安全。目前，通過一次及二次采油，原油采收率約為地質儲量的30％左右，尚有大量的殘留原油有待通過新技術進行開采。利用物理化學技術提高原油采收率已有大量研究及應用，但現有技術對大量存在的低滲、稠油等特殊油藏效果不佳。

限制原油采收率提高的主要因素為：一是原油中的瀝青、膠質、蠟質等高分子烴粘度大、流動性差；二是原油緊密附著在儲油層的多孔載體上，不易流動；三是原油中含有大量石蠟，隨著原油的開采，石蠟從地層深處向表層流動時，隨著溫度的降低，其凝結沉積在井壁及油管壁上，形成堵塞，影響原油開采的產量及管道運輸。因此可通過降解原油中高分子組分、降低原油粘度、減輕石蠟沉積堵塞來提高原油流動性來提高原油采收率。

微生物采油技術是包括微生物生長、運移及新陳代謝等復雜過程在內的生物學和物理化學綜合技術，具有多重作用及綜合效果，主要包括微生物地面發酵和微生物地下發酵兩大類，其地下發酵是把油層作為巨大的生物反應器，將配伍性較好的外源微生物注入其中，利用微生物在地下油層中生長繁殖及其代謝產物的綜合作用提高采收率。地下發酵需要向油藏地層注入大量微生物菌劑，所用的外源微生物為細菌，其產品為液體發酵生產的液態細菌制劑，需要的細菌菌劑數量極大。然而液態細菌制劑不能長期貯存，體積大，運輸不便，嚴重制約了驅油細菌在生產上的廣泛應用。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明的目的在于提供一株解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種及其固態菌劑的制備與應用，可用于對原油或石蠟的降解，進而提升原油的采收率。

為了達到以上目的，本發明采用以下技術方案予以實現。

(一)一株芽孢桿菌，分離自安塞油田、志丹油田的原油及油污土壤中，于2015年12月11日保藏于武漢市武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCCM2015740，命名為解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種6-2c(Bacillusamyloliquefacienssubsp.Amyloliquefaciens6-2c)。

解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種6-2c的16SrDNA序列分析：通過PCR反應，從解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種6-2c的16SrDNA序列中擴增得到1.6kb的基因片段，將PCR產物純化后，由南京金斯瑞生物科技有限公司進行測序。通過與Genebank中其他菌株16SrDNA序列進行對比分析，發現該芽孢桿菌6-2c與Bacillusamyloliquefacienssubsp.amyloliquefaciensFN597644的16SrDNA序列同源性達到99.78％，確認該芽孢桿菌為解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種(Bacillusamyloliquefacienssubsp.amyloliquefaciens)。

解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種6-2c的形態特征：菌落直徑較大，白色，圓形，邊緣不整齊，表面光滑濕潤，不透明，稍向上隆起，電鏡下細胞呈長桿狀，寬0.5～1.0μm，長2.0～3.0μm。

(二)一種芽孢細菌制劑，其特征在于，以解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種6-2c為活性成分。

所述芽孢細菌制劑為固態細菌制劑。

(三)一種以解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種6-2c為活性成分的芽孢細菌制劑的制備方法，其特征在于，采用液態-固態兩步發酵法，具體包括以下步驟：

步驟(1)，液體發酵培養基的制備：液體發酵培養基包括質量百分比為0.3％的牛肉膏、1％的蛋白胨、0.5％的NaCl、1％的紅糖、其余為自來水，pH值自然，混合，備用；

步驟(2)，液態種子液的制備：將解淀粉芽孢桿菌斜面接入到裝有液體發酵培養基的組培瓶中，在30℃、120r/min條件下，搖床培養3d，獲得液態種子液，備用；

步驟(3)，固態發酵培養基的制備：固態發酵培養基包括麩皮、原油及無機鹽溶液；按照無機鹽溶液∶麩皮∶原油為50～80mL∶90～110g∶1.5～2.5g的比例，先將麩皮與原油攪拌均勻，再加無機鹽溶液，繼續混合均勻，121℃條件下滅菌30min，備用；