[發明專利]一種右歸丸中多種成分含量的檢測方法

有效

• 申請號: 201610011285.8
• 申請日: 2016-01-08
• 公開（公告）號: CN105486775B
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 王蕾;劉浩龍;仇峰;趙暉;鄒海艷;楊鑫偉
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,王春霞

技術領域

本發明涉及一種右歸丸中多種成分含量的檢測方法，屬于成分檢測領域。

背景技術

右歸丸出自《景岳全書》，其組成和制備方法為“大懷熟地八兩，山藥(炒)四兩，山茱萸(微炒)三兩，枸杞(微炒)四兩，鹿角膠(炒珠)四兩，菟絲子(制)四兩，杜仲(姜湯炒)四兩，當歸三兩(便溏勿用)，肉桂二兩(漸可加至四兩)，制附子二兩(漸可加至五六兩)。上先將熟地蒸爛杵膏，加煉蜜為丸，如梧桐子大”。右歸丸被后世廣泛應用臨床治療腎陽虛的病證，并具有確切療效。

目前對右歸丸化學成分報道較少，杜麗霞等(杜麗霞，何文智，劉曉陽，王智民，任艷玲.左_右歸丸及其拆方中馬錢苷的變化規律.中國實驗方劑學雜志，2014，20(21)：56-59)采用HPLC法測定了右歸丸中馬錢苷的含量，為右歸丸的質量控制提供了標準；劉加寶(劉加寶.HPLC法測定右歸丸中桂皮醛的含量.黑龍江科學，2014，5(8)：15-16)通過HPLC法建立了快速測定右歸丸中桂皮醛含量的方法；王麗雙(王麗雙.中藥復方左歸丸、右歸丸和濟生腎氣丸的鑒別和質量評價研究：[碩士學位論文]，山東大學，2011年)建立了紅外指紋圖譜、HPLC指紋圖譜鑒定方法，對右歸丸的質量進行評價。但以上研究僅選取了右歸丸中一個活性成分測定或僅進行定性分析，覆蓋范圍相對局限，右歸丸中其他化學成分尚不清楚，應用于右歸丸的質量評價難免相對片面。

發明內容

本發明的目的是提供一種右歸丸中多種成分含量的檢測方法。

本發明所提供的檢測方法，包括如下步驟：

1)利用甲醇超聲提取右歸丸，然后進行濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液作為供試品溶液；

2)向所述供試品溶液中加入內標溶液，作為待測樣品；

3)采用高效液相色譜-電噴霧串聯質譜檢測所述待測樣品，即得到右歸丸中下述任一種成分的含量：

a)新烏頭原堿、b)山茱萸新苷、c)地黃苷A、d)附子靈、e)宋果靈、f)金絲桃苷、g)苯甲酰次烏頭原堿、h)松果菊苷、i)苯甲酰烏頭原堿、j)地黃苷D、k)苯甲酰中烏頭原堿、l)尼奧靈、m)馬錢苷、n)多根烏頭堿、o)獐芽菜苷和p)莫諾苷。

上述的檢測方法中，步驟1)中，過濾時得到的前幾滴濾液作為初濾液，常棄去，取0.1～0.2mL即可，后續所得濾液為續濾液，用于測定。

上述的檢測方法中，步驟1)中，所述甲醇的用量可為：0.1g所述右歸丸需要添加1～5mL甲醇。

上述的檢測方法中，步驟1)中，所述超聲提取的頻率可為20～80KHz，具體可為45KHz，所述超聲提取的時間可為30～60min，具體可為30min；

所述濾膜可為尼龍66膜，所述濾膜的孔徑可為0.22μm或0.45μm。

上述的檢測方法中，步驟2)中，

所述內標溶液為丁螺環酮的甲醇水溶液；

所述丁螺環酮的用量為：1～5ng/mL所述待測樣品。

上述的檢測方法中，步驟3)中，所述高效液相色譜-電噴霧串聯質譜檢測方法中的色譜條件如下：

流動相A：體積分數為0.05％～0.2％的甲酸的乙腈溶液，具體可為0.1％；

流動相B：體積分數為0.05％～0.2％的甲酸的水溶液，具體可為0.1％；

色譜柱：Agilent Eclipse Plus-C18色譜柱，柱長為100mm、柱徑為2.1mm和填料粒徑為3.5μm；

柱溫：20～30℃，具體可為25℃；

流速：0.45mL/min；

進樣體積：10或20μL；

每個樣品的運行時間：12.0min；

洗脫梯度如下：

0-1.5min：流動相A體積分數為98％，流動相B體積分數為2％；

1.5-4min：流動相A體積分數從98％降至55％，流動相B體積分數從2％升至45％；

4-8min：流動相A體積分數從55％降至15％，流動相B體積分數從45％升至85％；

8-9min：流動相A體積分數為15％，流動相B體積分數為85％；

9-9.01min：流動相A體積分數從15％升至98％，流動相B體積分數從85％降至2％；

9-12min：流動相A體積分數為98％，流動相B體積分數為2％。

所述高效液相色譜-電噴霧串聯質譜檢測步驟中的質譜條件如下：