[發(fā)明專(zhuān)利]一種從十二指腸中提取硫酸乙酰肝素的工藝

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610010556.8
• 申請(qǐng)日: 2016-01-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105504098B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊曉宏;郭林;李榮;李福川;陳少鵬;趙娟
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 東營(yíng)天東制藥有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C08B37/10
• 分類(lèi)號(hào): C08B37/10;A61K31/727;A61P29/00;A61P7/02;A61P3/06
• 代理公司: 北京一格知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11316
• 代理人: 滑春生,趙永偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從十二指腸中提取硫酸乙酰肝素的工藝。

背景技術(shù)

硫酸乙酰肝素是動(dòng)物組織中的一類(lèi)重要物質(zhì)。硫酸乙酰肝素在結(jié)構(gòu)上與肝素有一定程度相似, 都屬于粘多糖類(lèi)物質(zhì)。肝素雖在臨床上獲得廣泛的應(yīng)用, 但在臨床上尚存在較大的副作用如出血等, 使得它的應(yīng)用受到一定限制。然而,硫酸乙酰肝素在很大程度上克服了肝素應(yīng)用的副作用, 同時(shí)具有類(lèi)似肝素的抗炎、抗血栓和降血脂等生物作用。因此, 硫酸乙酰肝素是目前粘多糖中較有發(fā)展前途的新型生化藥物, 如國(guó)外商品和是一類(lèi)含多種粘多糖的混合物,它們都可稱(chēng)為廣義的類(lèi)肝素, 而硫酸乙酰肝素可認(rèn)為是中的一大組成成分, 國(guó)內(nèi)類(lèi)似的產(chǎn)品有冠心舒和豬十二指腸類(lèi)肝素等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種從十二指腸中提取硫酸乙酰肝素的工藝，旨在解決目前硫酸乙酰肝素產(chǎn)品質(zhì)量不可控、制備工藝復(fù)雜、化學(xué)純度不高，不能有效提高收率的問(wèn)題。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種從十二指腸中提取硫酸乙酰肝素的工藝，該工藝包括：

步驟一，將十二指腸解凍，去除多余油脂，洗凈絞碎，得到腸漿。

步驟二，在攪拌狀態(tài)下加入三倍量的水，調(diào)節(jié)溫度52-65℃，pH9.5-10.5,加入1%的堿性蛋白酶，酶解8-12小時(shí)，得混合料液；

步驟三，將混合料液pH調(diào)至7.0，溫度升至80-90℃，加熱10分鐘；

步驟四，將混合料液降溫至室溫，離心，收集離心液；

步驟五，離心液中加入10%的A98樹(shù)脂，在60℃水浴中吸附3-5小時(shí)；

步驟六，將吸附完的樹(shù)脂清洗干凈，加入3倍量的2.5%的氯化鈉溶液，分三次加入，每次攪拌30分鐘，洗脫液收集，再加入3倍量的6%的氯化鈉溶液，分三次加入，每次攪拌60分鐘，洗脫液收集。

步驟七，將收集的6%洗脫液，加入5%的氯化鈉，1.2-1.6倍藥用乙醇沉淀；

步驟八，將沉淀物溶解為5%的濃度，pH調(diào)至10.0-11.0，溫度80-90℃，加熱30分鐘，放置室溫，用0.45微米的濾膜過(guò)濾，加入3%氯化鈉，料液體積的1.2-1.6倍藥用乙醇沉淀；

步驟九，將沉淀物溶解為10%的濃度，溫度0-5℃，用3mol/L的鹽酸將pH調(diào)至0.5-2.0，低溫離心，收集上清液，加入3%氯化鈉，1.2-1.6倍藥用乙醇沉淀；

步驟十，將沉淀物溶解為10%的濃度，溫度40℃-45℃，pH6.5-7.0，加入10%氯化鈉，0.5-0.7倍藥用乙醇沉淀；

步驟十一，將沉淀物溶解為10%的濃度，溫度40℃-45℃，pH6.5-7.0，加入10%氯化鈉，0.9倍藥用乙醇沉淀；

步驟十二，將沉淀物溶解為15%的濃度，溫度30℃-35℃，pH10.0-10.5，加入1%H₂O_2,氧化10小時(shí)，經(jīng)0.22微米、0.1微米濾膜雙重過(guò)濾；

步驟十三，將沉淀物溶解為10%的濃度，溫度40℃-45℃，pH6.5-7.0，加入2%氯化鈉，1.2-1.6倍藥用乙醇沉淀；

步驟十四，將沉淀物研磨、真空干燥24小時(shí)。

進(jìn)一步，所述步驟八的堿加熱的處理方法為在溫度80-90℃，在攪拌狀態(tài)下將料液pH調(diào)節(jié)至10.0-11.0，該條件可將蛋白充分水解，有利于硫酸乙酰肝素充分解離，進(jìn)一步純化后得到硫酸乙酰肝素。

進(jìn)一步，所述步驟九的酸處理的處理方法為在溫度降至0℃-5℃時(shí)，在攪拌狀態(tài)下將溶液的pH值調(diào)節(jié)至0.5-2.0，低溫酸處理使蛋白變性，將糖鏈與蛋白進(jìn)一步分離。

進(jìn)一步，所述步驟十的低倍沉淀的處理方法為在溫度40℃-45℃，pH6.5-7.0，加入0.5-0.7倍藥用乙醇沉淀，可有效地去除雜質(zhì)制得硫酸乙酰肝素。

進(jìn)一步，所述從十二指腸中提取硫酸乙酰肝素的工藝經(jīng)絞碎 、生物酶解、樹(shù)脂吸附、 洗脫、堿加熱、酸處理、低倍沉淀、氧化、沉淀步驟，制得符合規(guī)定的硫酸乙酰肝素。

本發(fā)明提供的積極效果：本發(fā)明的產(chǎn)品質(zhì)量可控、制備工藝先進(jìn)、化學(xué)純度高，能有效提高收率；本發(fā)明方法工藝易于操作，生產(chǎn)成本低，產(chǎn)品穩(wěn)定性高，適合大規(guī)模生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的從十二指腸中提取硫酸乙酰肝素的工藝流程圖。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。