[發明專利]一種半夏塊莖的試管培養方法

在審

• 申請號: 201610010342.0
• 申請日: 2016-01-08
• 公開（公告）號: CN105660392A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 楊躍文;錢子剛;劉小莉;李國棟
• 申請（專利權）人: 云南中醫學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G1/00
• 代理公司: 北京國智京通知識產權代理有限公司 11501
• 代理人: 孫文彬

技術領域

本發明屬于植株培養技術領域，具體涉及一種半夏塊莖的試管培 養方法。

背景技術

半夏Pinelliaternata(Thunb)Breit.為天南星科植物，塊莖入藥，為 大宗常用中藥材。性溫，味辛，有毒。歸脾、胃、肺經。具有燥濕化 痰，降逆止嘔，消痞散結之功效。主治咳喘痰多，嘔吐反胃，胸脘痞 滿，頭痛眩暈，夜臥不安，癭瘤痰核，癰疽腫毒?，F代藥理及臨床研 究表明：半夏具有抗癌、抗生育和抗早孕、抗心率失常等作用，可治 療食管、賁門癌梗阻，冠心病，宮頸糜爛，尋常疣，急性乳腺炎等癥。

半夏生于山地、農田、溪邊或林下；分布于我國大部分地區。作 為運用廣泛的大宗中藥材，隨著市場用量的有增無減，半夏野生資源 逐年銳減，已不能滿足日益增長的市場需求，人工栽培勢在必行。塊 莖類藥材繁殖率低，種質易退化，自然生長周期長，栽培成本高。

現在半夏的栽培通常采用塊莖繁殖、珠芽繁殖、種子繁殖等傳統 方法。生長周期長、繁殖率低、種質易退化是在半夏生產中突出的問 題。

發明內容

本發明的目的是提供一種半夏塊莖的試管培養方法，利用組織培 養技術，由外植體直接誘導出小塊莖，作為種苗栽種，可提高繁殖率， 防止種質退化；縮短其生長周期，有效降低栽種成本。

本發明所采用的技術方案是，一種半夏塊莖的試管培養方法，包 括以下步驟：

步驟1、消毒和接種：取半夏的幼嫩的葉、莖，洗衣粉水洗后， 自來水沖洗凈，用蒸餾水加吐溫-80兩滴浸泡10min，在超凈工作臺 內用70％酒精消毒10s，漂白粉過飽和溶液上清液浸泡15min，0.05％ 砷汞浸泡4～6min，無菌水沖洗4～6次，無菌濾紙吸去表面水分， 將葉、莖切一傷口，葉分成1cm×1cm的大小，莖分為1.0～1.5cm 長的小段，再將有切口的一面接種到培養基上；

步驟2、誘導愈傷組織和芽分化及生根：在暗培養室培養5～8 天后，切口部分逐漸長出淡黃色顆粒狀的愈傷組織，到第10～20天 時形成多個芽聚生在一起的芽叢，芽的基部逐漸擴大，漸漸長成帶頂 芽的小塊莖叢；第21～30天后，小塊莖基部長出根；25～30天繼代 一次；

步驟3、移栽：培養25～30天后，選取生長好的小塊莖，用自 來水洗凈培養基，移栽入花盆中；移栽大約12天后有苗破土，大約 4天后葉片展開，為單葉，大約7天后出現三出復葉；在移栽1個月 內長出三種葉形：單葉、三出復葉、正分化成三出復葉的單葉；挖出 塊莖觀察，發現塊莖明顯增大，并相應處于三種成形階段：不規則塊 狀、圓球形、橢圓形，即移栽成功。

進一步地，步驟2中暗培養室培養的培養條件為：培養基MS+BA 1.0mg/L+NAA0.1～0.25mg/L在無光照條件下進行培養，誘導半夏 的莖、葉形成帶頂芽的小塊莖叢。

本發明的有益效果是：培養誘導形成的帶頂芽的半夏塊莖與野生 半夏在性狀、顯微特征及理化鑒別等多方面有相似性，初步證實組織 培養誘導形成半夏塊莖，是對保護野生半夏資源，降低栽培成本，實 現人工集約化栽培，適應不斷增長的市場需求的一種可行性嘗試。

具體實施方式

下面結合具體實施方式對本發明進行詳細說明。

本發明提供一種半夏塊莖的試管培養方法，包括以下步驟：

步驟1、消毒和接種：取半夏的幼嫩的葉、莖，洗衣粉水洗后， 自來水沖洗凈，用蒸餾水加吐溫-80兩滴浸泡10min，在超凈工作臺 內用70％酒精消毒10s，漂白粉過飽和溶液上清液浸泡15min，0.05％ 砷汞浸泡4～6min，無菌水沖洗4～6次，無菌濾紙吸去表面水分， 將葉、莖切一傷口，葉可分成1cm×1cm的大小，莖可分為1.0～1.5 cm長的小段，再將有切口的一面接種到培養基上。

步驟2、誘導愈傷組織和芽分化及生根：在暗培養室培養5～8 天后，切口部分逐漸長出淡黃色顆粒狀的愈傷組織，到第10～20天 時形成多個芽聚生在一起的芽叢，芽的基部逐漸擴大，漸漸長成帶頂 芽的小塊莖叢；第21～30天后，小塊莖基部長出根。25～30天可繼 代一次。