[發明專利]一種抗氧化藥物篩選試劑盒

有效

• 申請號: 201610009923.2
• 申請日: 2016-01-07
• 公開（公告）號: CN106950202B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 楊同玥
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種抗氧化藥物篩選試劑盒的使用方法，其特征在于所述試劑盒含有以下試劑:

①、試劑A:秀麗隱桿線蟲懸液；

②、試劑B:線蟲培養基；

③、試劑C:含有大腸桿菌0P50活菌的凍干粉或菌液；

④、試劑D:2’,7’二氯氫化熒光素乙二脂，

具體使用方法如下：

(1)采用抗氧化藥物篩選試劑盒篩選抗氧化藥,設定空白對照組和藥液測定組,將多孔板中的每一孔設置為一個獨立的實驗單元；

(2)藥液測定組,在無菌條件下將試劑B、含有待測藥液的溶液、5μl試劑C以及20μl試劑A依次加入多孔板的孔中,使得每孔總體積均為50μl,設定四個平行；

(3)空白對照組,在無菌條件下將試劑B、與待測藥液的溶液等量的無菌水或溶媒、5μl試劑C以及20μl試劑A依次加入多孔板的孔中，使得每孔總體積均為50μl,設定四個平行；

(4)加樣完成后用封口膜將多孔板密封，并將其置20℃恒溫搖床中震搖培養96小時；

(5)向所有加樣孔中依次加2',7'二氯氫化熒光素乙二脂,使2',7'二氯氫化熒光素乙二脂的終濃度為100μM,20℃恒溫處理30min；

(6)用熒光酶標儀在激發光504nm,發射光529nm條件下測定多孔板中各處理組的熒光值,熒光值即代表活性氧水平；

(7)采用統計軟件對實驗數據進行處理、分析，如果藥液測定組的活性氧水平低于空白對照組,則證明待測藥物具有抗氧化活性；如果藥液測定組的活性氧水平與空白對照組無顯著性差異,則證明待測藥物不具有抗氧化活性；以此評價待測藥物的抗氧化活性。

2.根據權利要求1所述的抗氧化藥物篩選試劑盒的使用方法,其特征在于,所述試劑盒還含有多孔板,該多孔板為黑色，帶有封口膜。

3.根據權利要求2所述的抗氧化藥物篩選試劑盒的使用方法,其特征在于,所述多孔板為384孔微孔板。

4.根據權利要求1所述的抗氧化藥物篩選試劑盒的使用方法,其特征在于,所述試劑A的濃度為50條秀麗隱桿線蟲/20μl,當試劑C為含有大腸桿菌0P50活菌的菌液時濃度為10mg大腸桿菌/ml,試劑B的體積為25ml。

5.根據權利要求1所述的抗氧化藥物篩選試劑盒的使用方法,其特征在于,所述秀麗隱桿線蟲的株系為野生型N2。

6.根據權利要求1所述的抗氧化藥物篩選試劑盒的使用方法,其特征在于,所述試劑A中的秀麗隱桿線蟲為經同步化后,孵化至L1期的秀麗隱桿線蟲,秀麗隱桿線蟲同步化的步驟如下:

用M9緩沖液將平板上的秀麗隱桿線蟲沖下來,將沖洗液吸入離心管；4000rpm離心3min,去除上清；加入裂解液；在渦旋儀上震蕩7min,使秀麗隱桿線蟲的蟲體破裂釋放卵；4000rpm/離心3min,去除上清,收集沉淀獲得大量的秀麗隱桿線蟲卵；M9緩沖液沖洗兩次,再加入1mlM9緩沖液，置于20℃培養箱中孵化48小時,獲得同步化后孵化至L1期的秀麗隱桿線蟲。

7.根據權利要求1所述的抗氧化藥物篩選試劑盒的使用方法，其特征在于所述具體使用方法(3)中所述的溶媒為DMSO、乙醇。