[發明專利]聯苯菊酯的快速金標試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 201610009524.6
• 申請日: 2016-01-07
• 公開（公告）號: CN105628922A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 李偉;夏亞中;周秋君;陸藝文
• 申請（專利權）人: 無錫市白蟻防治中心
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/532
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 曹祖良;劉海

技術領域

本發明涉及一種聯苯菊酯的快速金標試紙條及其制備方法，屬于農藥殘留免疫分析技術領域。

背景技術

聯苯菊酯（bifenthrin）又名天王星、蟲螨靈、畢芬寧，是由FMC公司研制開發的一種擬除蟲菊酯類殺蟲、殺螨劑，除對鱗翅目幼蟲、蚜蟲、粉虱、植食性葉螨等20多種農業害蟲有較好防效外，還對衛生害蟲白蟻有強烈的驅避及毒殺作用。聯苯菊酯對魚類及家蠶高毒，對蜜蜂中毒，但該藥在水中溶解度很低（1mg/L），且能較好的吸附于土壤顆粒表面，因此對環境造成的危害較小。聯苯菊酯具有作用迅速、殘效期長、在土壤中不移動等優點，作為一種理想的白蟻防治毒土處理藥劑，被廣泛應用于我國新建房屋的白蟻預防。

目前，對農藥殘留的檢測方法主要是儀器分析方法和酶聯免疫分析方法（ELISA）等。儀器分析方法包括高效液相色譜法（Highperformanceliquidchromatography，HPLC）、氣相色譜法（Gaschromatography，GC）、薄層色譜法（Thinlayerchromatography，TLC）、液-質串聯法（HPLC-MS）和氣-質串聯法（GC-MS）等，這些儀器分析方法雖然可以達到較高的檢測靈敏度，但需要復雜昂貴的儀器設備及專業操作人員，加之樣品前處理繁瑣費時、檢測費用高，難以滿足快速、在線檢測的需要。ELISA（EnzymeLinkedImmunosorbentAssay）方法是常用的免疫檢測方法，但是其卻有操作步驟相對較多，檢測時間較長，檢測結果不夠直觀，不能在線進行檢測等缺陷。因而ELISA在聯苯菊酯的現場快速檢測及施藥量控制上的應用受到很大的限制。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術中存在的不足，提供一種聯苯菊酯的快速金標試紙條及其制備方法，該金標試紙條具有特異、敏感、快速、簡便的優點。

按照本發明提供的技術方案，所述聯苯菊酯的快速金標試紙條，包括襯板，其特征是：在所述襯板上依次排列樣品墊、金標結合墊、纖維素膜和吸水墊，金標結合墊內吸附聯苯菊酯金標抗體，纖維素膜上設有隱形檢測線和隱形對照線，隱形檢測線采用聯苯菊酯半抗原偶聯的載體蛋白溶液印制，隱形對照線采用兔抗鼠IgG抗體印制。

進一步的，所述聯苯菊酯半抗原偶聯的載體蛋白溶液采用的載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、雞卵清白蛋白OVA或人血清白蛋白HAS。

進一步的，在所述樣品墊外部包裹樣品浸入端保護膜，在吸水墊外部包裹手柄端保護膜。

進一步的，在所述樣品浸入端保護膜上設有標識線。

進一步的，所述標識線位于偏向樣品墊一側約0.5厘米處。

進一步的，所述隱形檢測線靠近樣品墊一側設置，隱形對照線靠近吸水墊一側設置。

進一步的，述聯苯菊酯金標抗體為膠體金標記的聯苯菊酯單克隆抗體，該單克隆抗體由保藏編號為CCTCCNo.C2014135的雜交瘤細胞株所分泌。

所述聯苯菊酯的快速金標試紙條的制備方法，其特征是，包括以下步驟：

（1）聯苯菊酯半抗原的合成；

（2）聯苯菊酯半抗原與載體蛋白偶聯得到聯苯菊酯半抗原偶聯的載體蛋白溶液；

（3）聯苯菊酯金標抗體的制備；

（4）金標結合墊的制備；

（5）兔抗鼠IgG抗體的制備；

（6）聯苯菊酯半抗原偶聯的載體蛋白溶液和兔抗鼠IgG抗體包被纖維素膜；

（7）試紙條的組裝。

進一步的，所述步驟（4）金標結合墊的制備：將載體蛋白溶液以8μl/cm的量噴在金標結合墊上，42℃干燥50min后，再把金標記抗體以7μl/cm的量噴在金標結合墊上，干燥箱42℃干燥50min，真空干燥保存。

進一步的，所述步驟（6）具體為：把聯苯菊酯半抗原偶聯的載體蛋白溶液以1.2μl/cm的量噴在纖維素膜的下側，作為檢測線；把兔抗鼠IgG以1.2μl/cm的量噴在纖維素膜的上側，作為對照線。

本發明具備以下優點：

（1）特異性強，敏感性高：本發明所述金標試紙條以膠體金標記高親和力的單克隆抗體為基礎制備而成，金標抗體中的膠體金顆粒與抗體分子之間無共價鍵，兩者通過異性電荷間的范德華力相結合，膠體金的標記對單克隆抗體的特異性和親和力影響很小，而且有較高的標記率。因此，試紙條很好的保留了單克隆抗體的特性，具有較強的特異性和較高的敏感性，檢出最低限量為7.5mg/L。