[發明專利]結核菌群的免疫學檢測方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201610009079.3
• 申請日: 2013-04-04
• 公開（公告）號: CN105403700B
• 公開（公告）日: 2018-03-27
• 發明（設計）人: 野中浦雄;北川俊之
• 申請（專利權）人: 滋吾堂有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙)11277
• 代理人: 劉新宇,李茂家

本申請是中國專利申請201380018968.0的分案申請，原申請的申請日為2013年04月04日，發明名稱為結核菌群的免疫學檢測方法和試劑盒。

技術領域

本發明涉及高度安全的結核菌群(Mycobacterium tuberculosis complex)的免疫學檢測方法和試劑盒，其通過在預定的溫度下加熱處理生物樣品并免疫學檢測由此被細胞外分泌(extracellularly secreted)的結核菌群特異的分泌蛋白質，可在不進行培養操作的情況下由含有結核菌群的生物樣品直接簡便且迅速地進行。

背景技術

結核(Tuberculosis)為目前高度重要的傳染病，據稱每年日本國內有數千人、世界各地有數百萬人死于該疾病，根據傳染病法(Infectious Disease Law)疑似結核感染的患者必須入院。當診斷患者患有結核時醫師必須立即報告給當局，因而需要及時的響應。

屬于結核菌群的結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，人型結核菌)、牛結核分枝桿菌(Mycobacterium bovis，牛型結核菌)、鼠結核分枝桿菌(Mycobacterium microti，鼠型結核菌)和非洲結核分枝桿菌(Mycobacterium africanum，非洲型結核菌)已知為對人類致病的抗酸菌(acid-fast bacteria)。鳥結核分枝桿菌(Mycobacterium avium)、堪薩斯結核分枝桿菌(Mycobacterium kansasii)和海魚結核分枝桿菌(Mycobacterium marinum)等已知為非結核性分枝桿菌(non-tuberculous mycobacteria)。

感染有結核菌群的人類主要由結核分枝桿菌引起，在某些罕見病例中，由牛結核分枝桿菌引起。近年來，非結核性分枝桿菌種中，感染有鳥結核分枝桿菌的病例增加。由于這兩類感染存在類似的臨床癥狀，病因細菌的鑒定對于確定治療方針也是重要的。

因此，結核感染或非結核性分枝桿菌感染的區別檢測對于減輕患者負擔和適當地進行早期治療同樣是重要的。在另一方面，從公共衛生的角度，區別檢測對于防止第三人繼發感染的目的也是重要的。

迄今為止，作為檢測結核菌群的方法，已實施了基于培養的檢測方法。此類培養方法通過將待試驗的生物樣品接種至液體培養基或固體培養基并檢測生長的細菌細胞來進行。盡管使用液體培養基的方法可縮短待試驗的生物樣品的培養期，但該方法在操作期間具有繼發感染的高風險，因而需要高度安全的設備和裝置。使用固體培養基的方法需要長達大約2個月的時間才能獲得檢測結果。結核菌群必須使用高度安全的裝置在高度安全的環境中特別小心地培養以防止繼發感染。

作為用于從上述培養的生物樣品的培養基中鑒定結核菌群的方法，已知涉及免疫學測定分泌至培養基中的結核菌群特異的蛋白質的簡便檢測方法。

日本專利特開平11-108931號公報公開了用于檢測結核菌群存在的方法，該方法包括：將從結核病患者收集的生物樣品接種至固體培養基或液體培養基，培養結核菌群數日至數周；然后免疫學檢測分泌至培養基中的結核菌群特異的分泌蛋白質MPB64。根據該文獻，該方法與常規方法相比允許在培養后立即鑒定和檢測結核菌群并減少操作期間繼發感染的風險。

然而，該方法涉及培養包含在生物樣品中的結核菌群，并使用得到的培養物作為樣品。因此，該方法需要與直至結核菌群被檢測和鑒定的培養期幾乎相同的時間，因而需要大量勞力和費用。

如日本專利特開平11-108931號公報所述，MPB64為牛結核分枝桿菌BCG(M.bovis BCG)產生并被細胞外分泌的結核菌群特異的分泌蛋白質。MPT64為結核分枝桿菌產生并被細胞外分泌的結核菌群特異的分泌蛋白質。MPB64和MPT64已知為相同的物質。

日本專利特開2002-62299號公報指出，結核菌群特異的分泌蛋白質MPT64可在不培養包含在生物樣品中的結核菌群的情況下通過免疫學測定來檢測。該方法涉及處理生物樣品如痰并檢測包含在生物樣品中的MPT64，從而檢測結核菌群的存在。

然而，即使結核菌群存在于生物樣品中，除非MPB64由結核菌群被細胞外分泌并包含在生物樣品中，否則該方法也不能檢測出結核菌群。另外，豐度小的MPT64，即使分泌也需要大量的生物樣品并使操作復雜化。該操作增加了試驗對象和負責試驗人員的負擔。同時，可能會忽略結核菌群的感染，導致公共衛生問題。