[發明專利]人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性抗體RV3A5及其應用

有效

• 申請號: 201610008891.4
• 申請日: 2016-01-07
• 公開（公告）號: CN105481979B
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發明（設計）人: 梁米芳;孫麗娜;李川;李德新
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

本發明公開了一種人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性抗體RV3A5，該抗體運用噬菌體抗體庫技術篩選獲得。本發明的抗體特異性識別狂犬病毒顆粒抗原，且均針對狂犬病毒糖蛋白G，與狂犬病毒具有明顯的免疫熒光反應和酶聯免疫反應，具有抗狂犬病毒感染的中和活性功能。可將本發明抗體制成預防和治療狂犬病的特異性抗體藥物，從而可在臨床上用于預防和治療由狂犬病毒引起的狂犬病。

技術領域

本發明涉及基因工程抗體技術，特別是涉及人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性抗體RV3A5及其應用。

背景技術

狂犬病是由狂犬病毒引起的世界性人獸共患病，一旦發病100％死亡。目前世界上87個國家有狂犬病報道,每年約有5萬多人死于狂犬病(Knobel DL,et al.2005)。狂犬病暴露后預防是防治狂犬病的主要措施。對于嚴重暴露的人，世界衛生組織(World HealthOrganization,WHO)建議采用狂犬疫苗注射結合抗狂犬病毒免疫球蛋白(rabies immuneglobulin，RIG)的方法。目前使用的兩類RIG為人抗狂犬病毒免疫球蛋白(human rabiesimmune globulin，HRIG)和馬抗狂犬病毒免疫球蛋白(Equine rabies immune globulin，ERIG)。由于ERIG副反應比較嚴重，而且對某些疫苗的抗體反應有抑制，而HRIG價格昂貴，供應量有限并且有潛在的病原威脅。因此制備高效、價廉、副反應小的被動免疫制劑成為新的研發目標。

含有特異性抗體的人源或動物血清免疫球蛋白用以預防和治療傳染病已歷史悠久。單克隆抗體的體外抗病毒中和活性和體內保護肌體抵抗病毒攻擊已獲得許多實驗證明，如鼠抗甲肝病毒、漢坦病毒、麻疹病毒、RSV病毒、CMV病毒等中和性單克隆抗體可以在體內100％保護動物免受病毒攻擊。以抗原免疫動物獲得多抗血清的途徑一直是獲得抗體的經典方法，但缺乏特異性和均一性。繼而建立的B淋巴細胞雜交瘤技術使得眾多科學家通過細胞工程可以在體外定向地制備各種單克隆抗體(monoclonal antibody,McAb)，其特異性強，性質均一，易于大量生產。然而McAb多為鼠源性，鼠源McAb的異源性反應極大地限制了McAb作為治療制劑在人體的應用。免疫球蛋白(Vaccinia immune globulin,VIG)作為抗體成分主要來自捐獻者(恢復期病人)免疫血清，從獲得陽性血清到通過安全性檢測均需花費大量的人力和財力，這就使其大量制備受到限制，同時由于來源于血清因此容易發生血源性傳播疾病的感染。因此使用人源基因工程產品替代血制品則可克服這些缺陷，隨著人源基因工程抗體研究的不斷深入，給這一領域的生物制品發展帶來了新的希望和廣闊前景。通過抗體分子基因水平的重組可獲得多種多樣的特異性鼠源及人源抗體，使對單克隆抗體的研究有了突破性進展并越來越顯示出其重要意義及實際運用前景。人源抗狂犬病毒單克隆抗體的研制和噬菌體抗體庫技術的產生為解決被動免疫制劑問題提供了新的思路。狂犬單克隆抗體CR57和CR4098制成的單克隆抗體雞尾酒中和了26種典型的街毒株。對動物的保護性實驗表明，利用單克隆抗體雞尾酒進行治療具有可行性和優越性(Goudsmit J,etal.2006)。

上世紀80年代末90年代初興起的噬菌體抗體庫技術興起和整個基因工程抗體技術研究領域的發展，使當今世界人源或基因工程抗體的開發研究取得很大進展并已由基礎研究階段步入實質性應用研究和開發階段。人源抗病毒基因工程抗體，尤其是人源全抗體的研究成功，給各種病毒性傳染病的特異性預防和治療帶來了新的希望，在抗病毒感染生物藥領域逐漸形成了一類新的抗病毒藥，即所謂的抗體藥(Antibody Drug)。如同當初血源性疫苗向基因工程疫苗的轉變，現在也急需用基因工程抗體替代血源性VIG，如通過嵌合抗體技術(Boulianne,G.L.et al.,1984；Morrison,S.L.et al.,1984)、人源化抗體技術(Jones,P.T.et al.,1986)、攜帶人單抗的轉基因小鼠技術(Green,L.L.et al.,1994)、異體雜交瘤技術(James,K.et al.,1987)、噬菌體表面展示技術(Barbas,C.F.et al.,1991)等產生人源化抗體，已成為國內外研究的重大方向，并逐步走向成功。

發明內容