[發(fā)明專利]調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610008841.6
• 申請日: 2016-01-04
• 公開（公告）號: CN105543171A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葛嘯虎;陳海佳;王一飛;羅二梅
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州賽萊拉干細(xì)胞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/0775
• 代理公司: 北京市盈科律師事務(wù)所 11344
• 代理人: 劉雪花

1.調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增方法，其特征在于，將CD4⁺CD25⁺Treg細(xì)胞和 hUC-MSCs共同培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增方法，其特征在于，所述 CD4⁺CD25⁺Treg細(xì)胞和hUC-MSCs共同培養(yǎng)的方法為：

將hUC-MSCs接種到Transwell小室的上室，將CD4⁺CD25⁺Treg細(xì)胞接種 到Transwell小室的下室，共同培養(yǎng)14天，每隔2天對細(xì)胞進(jìn)行補液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增方法，其特征在于，所述 hUC-MSCs的密度為1×10⁵cells/ml，CD4⁺CD25⁺Treg細(xì)胞的密度為1× 10⁶cells/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增方法，其特征在于，共同培 養(yǎng)時所使用的培養(yǎng)基為X-VIVO15培養(yǎng)基，其中添加200-1000U/ml的IL-2和 10-50ng/ml的Flt3。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增方法，其特征在于， CD4⁺CD25⁺Treg細(xì)胞通過以下方法制備：

S11、采用密度梯度離心法自血液中分離PBMC；

S12、自PBMC中分選出CD4⁺CD25⁺Treg細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增方法，其特征在于，所述步 驟S12使用EasySep^TM人CD4⁺CD25⁺T細(xì)胞分選試劑盒自PBMC中分選出 CD4⁺CD25⁺Treg細(xì)胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增方法，其特征在于，所述血 液為系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的血液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增方法，其特征在于， hUC-MSCs通過以下方法制備：

S21、去除臍帶中的動靜脈和羊膜；將臍帶剪成碎塊；用0.2m/v％的Ⅱ型膠 原酶消化液臍帶碎塊2-4h，2000rpm離心得到原代的hUC-MSCs；

S22、用含5-20ng/mlEGFβ的X-VIVO15培養(yǎng)原代hUC-MSCs，24h后換液， 去掉未貼壁細(xì)胞；繼續(xù)培養(yǎng)至hUC-MSCs匯合度達(dá)到90％，用0.25m/v％胰蛋白 酶消化2min，1000rpm離心得到P1代hUC-MSCs；繼續(xù)培養(yǎng)直到獲得P3代 hUC-MSCs。