[發明專利]一種用于生產魚類敗血病病原維氏氣單胞菌減毒活疫苗的特異性肽適體

有效

• 申請號: 201610007988.3
• 申請日: 2016-01-07
• 公開（公告）號: CN105779370B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 劉柱;劉鵬;章躍陵;胡新文;唐燕瓊;唐鴻倩
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C07K14/00;C12N15/11;C12N15/74;A61P39/02;A61P31/04;C12R1/01
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 強紅剛

本發明公開了一種魚類敗血病病原維氏氣單胞菌減毒活疫苗及其應用，其將野生型維氏氣單胞菌通過基因改造導入一種特異性肽適體SNP?L1，使其毒力減弱，得到維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)減毒株L1，利用該減毒株L1制備的活疫苗通過腹腔注射斑馬魚，后期免疫保護率可達65％，可有效預防魚類細菌性敗血病的發生，具有一定的應用價值和減毒活疫苗的開發前景。

技術領域

本發明涉及一種用于生產魚類敗血病病原維氏氣單胞菌減毒活疫苗的特異性肽適體。

背景技術

自改革開放以來，我國水產養殖業發展迅速，取得了矚目的成就，2014年全年水產品產量6450萬噸，比上年增長4.5％。但是人們過于追求經濟效益，不斷擴大養殖規模，養殖密度增大，以及一些不科學地管理養殖模式，導致水產養殖細菌病害頻發，嚴重限制水產養殖業的快速穩定發展。

其中由維氏氣單胞菌引起的細菌性病害在水產養殖業中很常見。它是一種革蘭氏陰性桿狀細菌，一般從臨床、自然環境和食品中分離獲得，能夠侵染多種水產養殖動物，如蝦，鯽魚、中華絨螯蟹、團頭魴、泥鰍、錦鯉等，嚴重危害我國水產養殖業的發展。同時對人類健康安全也造成威脅，它能夠引起人類傷口感染，腹瀉及免疫功能低下患者的敗血癥。

目前，水產養殖業中主要采用藥物防控細菌病害，如大量使用廣譜抗生素等化學藥物進行防治。然而，抗生素在長期使用過程中容易導致病原菌耐藥性增強、藥物殘留、生態環境污染以及危害人類健康等諸多問題，很難實現我國水產養殖業的可持續健康發展。相對于化學藥物，疫苗可以安全有效預防魚類傳染性疾病的發生，是當前魚類細菌性疾病防控的最有效方法。但相對于人用和獸用疫苗，魚用疫苗很少，尤其關于維氏氣單胞菌減毒活疫苗目前在國內外尚未見報道。

發明內容

鑒于現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種魚類細菌性敗血病病原維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)減毒活疫苗及其應用。

為了實現本發明的目的，發明人經過大量試驗研究篩選特異性肽適體，并將特異性肽適體通過細菌三親接合方式導入到野生型毒株維氏氣單胞菌中，從而獲得了一種維氏氣單胞菌減毒活疫苗。具體地，本發明的技術方案概況如下：

一種維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)減毒株L1，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會微生物中心(保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所；郵編100101)，保藏日期為2015年12月23日，保藏編號為CGMCCNo.11922。

本發明所述的維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)減毒株L1，它是將能表達特異性肽適體SNP-L1的pRE112質粒導入野生型維氏氣單胞菌后而得，所述的特異性肽適體SNP-L1的氨基酸序列如序列表中序列1所示。

本發明還提供了一種特異性肽適體SNP-L1，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。

另外，本發明還提供了一種編碼上述特異性肽適體SNP-L1的核苷酸序列。優選地，編碼上述特異性肽適體SNP-L1的核苷酸序列為序列表中序列2所示。

進一步地，本發明還提供了一種含有上述特異性肽適體SNP-L1的重組質粒pRE112-SNP-L1；以及提供了一種含有該重組質粒pRE112-SNP-L1的宿主。

最后，本發明還提供了上述維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)減毒株L1在制備預防魚類免受維氏氣單胞菌侵染方面的減毒活疫苗中的應用。