[發明專利]神經肽Natalisin和其受體基因及在桔小實蠅特異性控制劑中的應用

有效

• 申請號: 201610007681.3
• 申請日: 2016-01-07
• 公開（公告）號: CN105505944B
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 蔣紅波;桂順華;劉小強;王進軍
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/16
• 分類號: C12N15/16;C07K14/575;C12N15/10;C12N15/12;C07K14/72
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務所(普通合伙) 50211
• 代理人: 郭云

本發明公開了一種神經肽Natalisin和其受體基因及在桔小實蠅特異性控制劑中的應用，提供了桔小實蠅神經肽Natalisin基因如SEQ ID NO:9所示，其編碼的蛋白質如SEQ ID NO:10所示；還提供桔小實蠅神經肽Natalisin成熟肽的核苷酸序列如SEQ ID NO:11～13所示，其編碼的蛋白質如SEQ ID NO:14～16所示；還提供桔小實蠅神經肽Natalisin受體基因如SEQ ID NO:17所示，其編碼的蛋白質如SEQ ID NO:18所示；還提供上述核苷酸和氨基酸序列的應用，桔小實蠅神經肽Natalisin和其受體基因的巢式PCR擴增方法。

技術領域

本發明屬于基因工程領域，具體涉及一種神經肽Natalisin和其受體基因及在桔小實蠅特異性控制劑中的應用。

背景技術

柑橘是重要的經濟作物，隨著我國農業產業結構調整，柑橘產業規模不斷擴大，已經逐漸成為多地區的支柱產業。桔小實蠅(Bactrocera dorsalis)由于其極強的環境適應能力和入侵擴散能力，嚴重危害多種重要經濟果蔬，尤其是柑橘。目前，桔小實蠅已成為柑橘產業健康發展的巨大威脅。目前，桔小實蠅已對市面上的有機磷殺蟲劑、擬除蟲菊酯和阿維菌素等農藥產生了嚴重的抗藥性；農藥殘留嚴重污染環境，對食品安全造成了隱患；農藥的特異性較低，威脅到有害生物天敵，有加劇農業有害生物爆發的風險。

Natalisin(NTL)信號傳遞系統是一個全新的神經肽信號傳遞系統。其受體(Natalisin receptor，NTLR)是G蛋白偶聯受體(G-protein coupled receptor，GPCR)。在果蠅中，利用轉基因技術敲除Natalisin后，果蠅成蟲交配欲望顯著降低。另外，通過RNAi沉默赤擬谷盜Natalisin或者其受體后，雌蟲交配后產卵力顯著下降，表明Natalisin通過其受體調控著昆蟲的交配行為以及生殖力。GPCR業已成為藥物研發的重要靶標體系，50％以上的臨床用藥以及正在研發中的藥物作用于GPCR，據美國華爾街日報曾經統計，全球20種最暢銷藥物中有12種以GPCR為靶標，每年的銷售總額達500多億美元。然而目前昆蟲中的GPCR作為農藥靶標鮮有報道，在桔小實蠅中的應用更是鮮有。以Natalisin受體作為潛在靶標創制害蟲特異的殺蟲劑來達到控制桔小實蠅的方法受到越來越多的重視，也具有良好的應用前景。

發明內容

本發明的目的是提供神經肽Natalisin和其受體基因及在桔小實蠅特異性控制劑中的應用。

在本發明的第一方面，提供一種桔小實蠅神經肽Natalisin基因及其編碼的蛋白質，所述桔小實蠅神經肽Natalisin基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，其編碼的蛋白質的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。

在本發明的另一方面，提供一種桔小實蠅神經肽Natalisin基因的擴增方法，包括如下步驟：提取桔小實蠅總RNA，反轉錄為cDNA，以cDNA為模板采用巢式PCR的擴增方法，第一輪擴增的引物為Natalisin-1-F和Natalisin-1-R，第二輪擴增的引物為Natalisin-2-F和Natalisin-2-R，所述引物的序列為：

Natalisin-1-F：GAGCCGAAAACCGAGAAAAC，

Natalisin-1-R：CCACCAGTGGCAACATTAAAC，

Natalisin-2-F：GAAAACGGCATGAAGATCAC，

Natalisin-2-R：GCAACATTAAACTTTATATGCCG。

在本發明的另一方面，提供一種桔小實蠅神經肽Natalisin成熟肽(也稱NTLR配體)基因及其編碼的蛋白質，所述桔小實蠅神經肽Natalisin成熟肽的核苷酸序列如SEQ IDNO:11～13所示，所述核苷酸序列編碼的蛋白質的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:14～16所示。