[發明專利]一種用VCAM-1檢測MSC促內皮細胞增殖能力的方法

有效

• 申請號: 201610007342.5
• 申請日: 2016-01-06
• 公開（公告）號: CN105483206B
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發明（設計）人: 梁璐;耿潔;韓之海;趙欽軍;韓忠朝
• 申請（專利權）人: 北京漢氏聯合生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;G01N33/68
• 代理公司: 北京國帆知識產權代理事務所(普通合伙) 11334
• 代理人: 李增朝

本發明公開了一種用VCAM?1檢測MSC促內皮細胞增殖能力的方法，其特征在于發現了一種已知蛋白VCAM?1的新用途，通過EL I SA檢測VCAM?1的蛋白表達，用Bradford法測定總蛋白含量，利用每1g總蛋白中VCAM?1的蛋白含量來反映細胞的促內皮細胞增殖能力，以此方法可以對MSC的促內皮細胞增殖能力進行定量。

技術領域

本發明涉及干細胞領域，具體而言，涉及用VCAM-1(血管細胞粘附分子-1)檢測MSC(間充質干細胞)促內皮細胞增殖能力的方法。

背景技術

血管內皮細胞粘附分子-1(VCAM-1)，也稱為CD106，是一種屬于免疫球蛋白超家族的細胞表面唾液酸糖蛋白。VCAM-1有兩個亞型，具有六個或七個由選擇性剪接產生兩種形式的VCAM-1的胞外Ig樣結構域，主要的存在形式是具有七個胞外Ig樣結構域的亞型。VCAM-1是一種內皮細胞配體，與白細胞上表達的VLA-4抗原和α4β7整合素結合，從而介導白細胞-內皮細胞粘附和信號轉導。炎癥性腸病，動脈粥樣硬化，同種異體移植物排斥，感染和哮喘反映中內皮細胞上VCAM-1被誘導表達。在這些反映中，VCAM-1為白細胞遷移構成一個支架。VCAM-1也可以激活內皮細胞內的信號導致的“內皮細胞門”的開啟，通過它白細胞得以遷移。VCAM-1已經被認為是一種潛在的抗炎治療靶點，減少VCAM-1的表達將減緩動脈粥樣硬化的發展。此外，在血管內皮細胞的VCAM-1激活的信號由細胞因子調控，這表明它在炎癥過程中對于內皮細胞粘附分子的表達和功能是很重要的。

VCAM-1在大多數靜止內皮細胞低表達，在血管損傷、應激等情況下可被IL-1、TNF-α、IL-4等細胞因子誘導，主要表達于新生血管區。其體內的可溶形式通過介導內皮細胞趨化而顯示血管生成活性。

血管是人體的重要組成部分，血管生成(angiogenesis)是從已有血管發芽生成新血管的過程，整個血管的內表面都是由一層內皮細胞所覆蓋的，血管的生成與血管內皮細胞遷移和增殖相關。

體內外實驗證明MSC具有治療性血管生成作用，它可以通過直接分化成內皮細胞或者血管平滑肌細胞參與血管新生，另外它還能夠分泌多種促血管形成因子，改善微環境，促進血管內皮細胞增殖和遷移，進而促進血管新生。

MSC的促血管新生的特性對肢體缺血的治療有著非常重要的臨床意義。但是目前缺乏檢測和評價MSC的促血管新生能力的方法，阻礙了細胞的臨床應用。

本發明的發明人通過研究發現，MSC的促血管新生能力中，VCAM-1表現出高度的相關性，基于這一發現發明了本發明。

本發明的目的在于提供一種全新的、能夠有效檢測MSC促血管新生能力的方法。

發明內容

本發明的第一技術方案為，一種用VCAM-1檢測MSC促內皮細胞增殖能力的方法，其特征在于，檢測MSC中VCAM-1的蛋白含量，測定總蛋白含量，根據總蛋白中的VCAM-1的蛋白含量百分比來檢測MSC的促內皮細胞增殖能力。

第二技術方案為，基于第一技術方案，其特征在于，所述MSC為包含VCAM-1陽性的MSC。

第三技術方案為，基于第二技術方案，其特征在于，

步驟1，將MSC和內皮細胞共培養后，檢測內皮細胞的增殖數，得到MSC促進內皮細胞增殖率，

步驟2，測定MSC的總蛋白含量，

步驟3，檢測MSC的VCAM-1的蛋白含量，

步驟4，計算總蛋白中的VCAM-1的蛋白含量百分比，

步驟5，應用統計學方法分析VCAM-1的蛋白含量百分比與步驟1中的MSC促進內皮細胞增殖率之間的相關性，對VCAM-1的蛋白含量百分比與促內皮細胞增殖能力之間的關系進行定量。