[發明專利]高效液相色譜串聯二級質譜技術檢測尿液中8-羥基脫氧鳥苷和8-羥基鳥苷的試劑盒

在審

• 申請號: 201610005612.9
• 申請日: 2016-01-06
• 公開（公告）號: CN105548402A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發明（設計）人: 張衛衛;于嘉屏
• 申請（專利權）人: 上海迪安醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

技術領域

本發明屬于生化檢測領域，具體涉及一種高效液相色譜串聯二級質譜技術檢測尿液 中8-羥基脫氧鳥苷和8-羥基鳥苷的試劑盒。

背景技術

DNA和RNA氧化損傷應激產物作為生物標記物的潛在用途和價值是生物醫學研究 的一個重要方面。8-羥基脫氧鳥苷和8-羥基鳥苷作為兩種重要的氧化標記物，在組織細 胞內產生，經血液運輸，由腎臟隨尿液排出體外。由于兩種物質在體內較為穩定，且尿 液樣本易得，可以實現無創檢測，通過對尿液中兩種物質的監測可以為有效評價機體各 種因素引起的氧化損傷提供幫助。此外，通過對健康人體內兩種生物標記物的含量檢測， 可以評估性別、年齡和吸煙等潛在因子的影響作用。因此，開發一種經濟、高效的8- 羥基脫氧鳥苷和8-羥基鳥苷檢測方法至關重要。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種高效液相色譜串聯二級質譜技術檢測尿液中 8-羥基脫氧鳥苷和8-羥基鳥苷的試劑盒，以解決現有技術存在的特異性較差和靈敏度低 的問題。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

高效液相色譜串聯二級質譜技術檢測尿液中8-羥基脫氧鳥苷和8-羥基鳥苷的試劑 盒，它包括如下試劑：

(1)洗脫液：

洗脫液A：0.1％v/v甲酸水溶液；

洗脫液B：乙腈；

(2)標準品溶液：含8-羥基脫氧鳥苷和8-羥基鳥苷的空白人工尿液基質溶液；

(3)內標物工作液：含[¹³C，¹⁵N₂]-8-羥基脫氧鳥苷的甲醇溶液；

(4)稀釋液：

稀釋液1：空白人工尿液基質；

稀釋液2：甲醇；

(5)有機溶劑：甲醇；

(6)質控品：含有8-羥基脫氧鳥苷和8-羥基鳥苷的空白人工尿液基質溶液，分高 中低三個濃度，分別為QC(H)、QC(M)、QC(L)；

其中，QC(H)、QC(M)、QC(L)中8-羥基脫氧鳥苷和8-羥基鳥苷質控品對應濃度見 表1；

表18-羥基脫氧鳥苷和8-羥基鳥苷質控品對應濃度(單位ng/mL)

其中，所述的標準品溶液包括混合標準液C2和混合標準液C3；其中，所述的混合 標準液C2為含濃度為96ng/mL的8-羥基脫氧鳥苷和濃度為97ng/mL的8-羥基鳥苷的空 白人工尿液基質溶液，所述的混合標準液C3為含濃度為9.6ng/mL的8-羥基脫氧鳥苷和 濃度為9.7ng/mL的8-羥基鳥苷的空白人工尿液基質溶液。

其中，所述的內標物工作液為含濃度為0.991μg/mL的[¹³C，¹⁵N₂]-8-羥基脫氧鳥苷 的甲醇溶液。

其中，所述的空白人工尿液基質為含0.5586g/L二水合氯化鈣、0.6099g/L六水合氯 化鎂、4.2077g/L氯化鈉、2.0596g/L硫酸鈉、0.6470g/L檸檬酸鈉二水合物、0.0201g/L 草酸鈉、2.5449g/L磷酸二氫鉀、1.4388g/L氯化鉀、0.9200g/L氯化銨、2.4985g/L尿素 和1.0520g/L肌酐的水溶液。

其中，所述的尿液為人或動物的尿液。

上述高效液相色譜串聯二級質譜技術檢測尿液中8-羥基脫氧鳥苷和8-羥基鳥苷的 試劑盒的制備方法，

(1)洗脫液：

洗脫液A：配制0.1％v/v甲酸水溶液；

洗脫液B：乙腈；

(2)標準品溶液：