[發(fā)明專利]利用交聯(lián)蛋白質(zhì)晶體作籽晶提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610004553.3
• 申請(qǐng)日: 2016-01-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105566443B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹大川;閆二開(kāi);張辰艷;劉雅麗;周仁斌;陳達(dá);劉悅;李嘉欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K1/30
• 分類號(hào): C07K1/30
• 代理公司: 西北工業(yè)大學(xué)專利中心 61204
• 代理人: 顧潮琪

1.一種利用交聯(lián)蛋白質(zhì)晶體作籽晶提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率的方法，其特征在于包括下述步驟：

第一步，生長(zhǎng)蛋白質(zhì)晶體，并對(duì)蛋白質(zhì)晶體進(jìn)行化學(xué)交聯(lián)，將得到的交聯(lián)蛋白質(zhì)晶體溶于超純水中，濃度均為5-20mg/ml，制得籽晶溶液；

第二步，在結(jié)晶板的每個(gè)坐滴孔中滴入0.5-2μl的籽晶溶液，自然晾干結(jié)晶板；

第三步，利用篩選試劑盒對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行結(jié)晶條件篩選，首先制備蛋白質(zhì)溶液；然后向結(jié)晶板的每個(gè)深孔中加入80μl的池液，將篩選結(jié)晶劑和蛋白質(zhì)溶液按照1：1的質(zhì)量比混合得到結(jié)晶溶液，將2μl的結(jié)晶液滴滴入結(jié)晶板的坐滴孔，密封結(jié)晶板，并在277-293K的結(jié)晶溫度下結(jié)晶3-7天；

第四步，觀察蛋白質(zhì)晶體的形貌，統(tǒng)計(jì)蛋白質(zhì)晶體的結(jié)晶條件數(shù)；收集并衍射蛋白質(zhì)晶體，獲取衍射數(shù)據(jù)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用交聯(lián)蛋白質(zhì)晶體作籽晶提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率的方法，其特征在于：所述的籽晶溶液選用交聯(lián)溶菌酶作為籽晶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用交聯(lián)蛋白質(zhì)晶體作籽晶提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率的方法，其特征在于：所述的籽晶溶液選用質(zhì)量比為1：1的交聯(lián)溶菌酶和過(guò)氧化氫酶晶體作為籽晶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用交聯(lián)蛋白質(zhì)晶體作籽晶提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率的方法，其特征在于：所述的籽晶溶液選用質(zhì)量比為1：1：1：1：1的交聯(lián)溶菌酶晶體、過(guò)氧化氫酶、蛋白質(zhì)酶K、奇異果甜蛋白質(zhì)和糜蛋白酶原AII晶體作為籽晶。