[發明專利]mir-1292及其靶基因在預防和治療骨肉瘤轉移中的應用

有效

• 申請號: 201610003247.8
• 申請日: 2016-01-04
• 公開（公告）號: CN105561341B
• 公開（公告）日: 2019-01-22
• 發明（設計）人: 楊祚璋;李曉娟;李東奇;陳彥錦;楊義豪
• 申請（專利權）人: 楊祚璋
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K31/7088;C12Q1/6886;G01N33/574;A61P35/00
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 孟祥斌;朱萍

本發明涉及mir?1292及其靶基因在預防和治療骨肉瘤轉移中的應用，更具體的涉及mir?1292和/或miR?1292?5p及其靶基因DST在診治骨肉瘤中的新用途。發明對轉移性骨肉瘤患者及正常對照進行高通量測序分析，獲得其miRNA和mRNA的表達數據，選取后備miR?1292?5p及其靶基因DST進行分子生物學驗證及靶標驗證，結果顯示，本發明提供的miR?1292?5p及其靶基因DST與骨肉瘤轉移密切相關，可用于臨床診斷及預防檢測，具有很好的臨床應用價值。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體的涉及mir-1292及其靶基因在預防和治療骨肉瘤轉移中的應用，更具體的涉及mir-1292和/或miR-1292-5p及其靶基因DST在診治骨肉瘤中的新用途。

背景技術

骨肉瘤是常見的原發性惡性腫瘤之一，約占全部骨科腫瘤的15％左右，多發生在青少年，社會危害極大。化療方案和手術方式改進使得生存率得到逐步提高，但是近十年來骨肉瘤的生存率沒有得到進一步地改善，這其中早期轉移是一個重要限制因素。骨肉瘤發病特點是絕大多數骨肉瘤在診斷時己經成為高等級的惡性腫瘤，超過15％的患者出現臨床肺轉移病灶，由于現在的檢測手段限制，80％的患者微小轉移病灶無法查出。骨肉瘤的原發病灶患者生存率在65％左右，一旦出現轉移，骨肉瘤的生存率只有25％，甚至更低。研究揭示骨肉瘤轉移機制是臨床中迫切需要解決的重大問題。

miRNA通常由RNA聚合酶II(Pol II)轉錄生成。Pol II結合在以后形成發夾結構的頸環DNA序列附近。生成的轉錄本經修飾添加5’帽子結構和3’末端多腺苷酸尾巴結構，并剪切，生成的產物稱為初級miRNA(pri-miRNA)，該產物可能長達數千或數百核苷酸，隨后進一步生成前miRNA(pre-miRNA)，在胞漿中，pre-miRNA發夾結構經RNase III Dicer切割處理。這種內源性核糖核酸酶(endoribonuclease)與發夾結構的3’相互作用并在環的3’和5’臂上完成切割，產生長約22nt并不完美匹配的miRNA：miRNA*雙鏈結構。

miRNA與靶mRNA的典型作用方式主要有兩種。在大多數情況下，復合物中的單鏈miRNA與靶mRNA的3’UTR不完全互補配對，阻斷靶基因的翻譯，從而調節基因表達。這種方式主要影響蛋白表達水平，并不影響mRNA的穩定性。另一種作用方式與siRNA類似，當miRNA與mRNA完全互補配對時，Ago2蛋白通過切割mRNA直接導致其降解，實現基因沉默。總之，當前認為miRNA以何種方式與目的基因作用和miRNA與目的基因的配對程度有關。miRNA與目的基因配對不完全時，miRNA就以抑制目的基因的表達發揮作用；miRNA與目的基因某段序列配對完全時，就可能引起目的基因在互補區斷裂而導致基因沉默。另外，miRNAs有時候也導致組氨酸修飾和啟動子區的DNA甲基化，從而影響靶基因的表達。

發明基于高通量測序方法，對5例轉移性骨肉瘤患者及10名正常人進行測序，獲得其miRNA和mRNA的表達數據，進而進行生物信息學分析，選取后備miRNA和mRNA進行分子生物學驗證及靶標驗證，結果顯示，本發明提供的miRNA和mRNA與骨肉瘤密切相關，可用于臨床診斷及預防檢測，具有很好的臨床應用價值。

發明內容

本發明的目的在于提供mir-1292和/或其成熟miRNA在制備診斷和/或防治骨肉瘤試劑中的應用。

mir-1292的序列見序列表SEQ ID NO 1。mir-1292的成熟miRNA為miR-1292-5p和miR-1292-3p序列見序列表SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3。

進一步的，所述骨肉瘤為轉移性骨肉瘤。